细菌学诊断

   细菌感染的检测方法主要是从病人标本中分离与鉴定特异的病原菌，并进行药物敏感试验以提供临床选择药物的依据，或检测标本中特异性抗原成分来确定病因。
 

   细菌学诊断
 

   （一）标本采集与运送
 

   标本的正确采集与送检过程是致病菌检出成败的一个重要因素。因此，在采集标本时应注意以下几点：
 

   1.采集标本时应严格注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。
 

   2.根据致病菌的种类、在体内分布及感染特点确定采取何种标本。如流行性脑膜炎病人取脑脊液、血液或皮肤瘀斑；伤寒病人在病程1～2周内取血液，2～3周内取粪便等。
 

   3.标本的采集应尽可能在使用抗菌药物之前，否 则此种标本应在分离培养时加入某药物的拮抗剂。如用青霉素的需加青霉素酶、用磺胺药的需加对氨苯甲酸等。采取局部病变标本时，不可用消毒剂，必要时宜以无菌生理盐水冲洗、拭干后再取材。
 

   4.尽可能采集病变明显部位的材料。如细菌性痢疾患者应取沾有脓血或黏液的粪便，肺结核病人应取干酪样痰液等。
 

   5.标本必须新鲜，采集后应尽快送检。
 

   6.送检过程中，除不耐冷的脑膜炎球菌、淋球菌等需保暖外，多数细菌标本可直接送检或冷藏送检。粪便标本常含杂菌，应置于甘油缓冲盐水保存液中。
 

   7.检验容器上需贴好标签，相应化验单上应写明病人的姓名、床 号、检验目的、标 本种类及临床诊断等项目，以供检验者参考。
 

   （二）检验程序
 

   1.直接涂片染色镜检为病原菌检测的简便和快速方法之一。对某些形态和染色性等方面具有特征的致病菌，直接涂片染色后镜检即可做出初步诊断，如痰液中查见抗酸性细长杆菌，脓液中发现革兰阳性葡萄串状球菌等，可分别做出结核杆菌和葡萄球菌的初步诊断。另外，某些细菌在直接涂片后，以特异性荧光抗体染色在荧光显微镜下观察发出荧光的菌体，如粪便中的志贺菌、霍乱弧菌等，借此技术可作快速诊断。
 

   2.分离培养与鉴定
 

   （1）分离培养：大多数细菌的形态和染色性并无明显特征。因此需作分离培养，以获得纯培养后进一步鉴定。原为无菌部位采取的血液、脑脊液等标本，可直接接种于营养丰富的液体或固体培养基中；从正常菌群存在的部位采取的标本，应接种于选择或鉴别培养基中。接种后置37℃孵育，经18 ～24h大多可形成肉眼可见的菌落。分离培养的阳性率要比直接涂片镜检高，但需要的时间较长。故遇到白喉等急性传染病时，可根据病人临床表现和直接涂片镜检结果做出初步诊断并及时治疗，不必等待培养报告，以免延误治疗。
 

   （2）鉴定：根据不同细菌的形态、染色、生长特征等可初步鉴定，但要确定何种病原菌还需将细菌接种于各种特殊培养基进行生化试验及血清学试验的鉴定。
 

   1）生化试验：不同致病菌具有不同的代谢酶系，借此可对致病菌进行鉴别。例如肠道杆菌均是革兰阴性杆菌，形态、染色基本相同，菌落特征亦类似。但不同的细菌对糖和蛋白质的分解能力不同，其代谢产物也不完全一样，因而可利用不同代谢物进行生化试验予以区别。现已有多种微量、快速、半自动或全自动的细菌生化反应试剂盒（条）和检测仪器可供实验室和临床使用。
 

   2）血清学试验：各种细菌各自都有特异性的抗原成分（如菌体抗原、鞭毛抗原、荚膜抗原等），采用含有已知特异抗体的免疫血清与分离培养出的未知纯种细菌进行血清学试验，可以确定致病菌的种或型。常用方法有玻片凝集试验，用已知免疫血清与未知细菌在玻片上出现凝集颗粒即为阳性，说明待测细菌有相应的抗原成分。此方法快速、敏感、特异性强，有助于病因的确定。另外，免疫荧光、协同凝集、对流免疫电泳、酶免疫、间接血凝、乳胶凝集等试验亦可快速、灵敏地检测标本中的微量致病菌特异抗原。
 

   3）分子生物学技术：近年来应用核酸杂交和聚合酶链反应（PCR）技术检测致病微生物核酸在临床诊断学方面有了重大突破。
 

   4）其他检测法：①气液相色谱法。利用检测细菌在代谢过程中产生的挥发性脂肪酸或非挥发性脂肪酸，借气液相色谱技术来诊断厌氧菌感染；②噬菌体、细菌素分型。噬菌体和细菌素对细菌有高度的特异性，可用于细菌分型，主要适用于流行病学调查。