金黄色葡萄球菌检测

葡萄球菌属细菌是最常见的化脓性球菌，金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属中致病性最强的一种，也是人类食物中毒症中常见的病原菌之一。广泛分布在土壤、水、空气及物品上，人和动物的皮肤及与外界相通的腔道也常有本菌存在。它可产生多种毒素和酶，能引起局部及全身化脓性炎症、急性肠胃炎，严重时可发展为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中的重要病原菌。2010年版《中国药典》规定局部给药的外用制剂，每1g、1ml或10cm2不得检出金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌检测程序：

1.增菌培养 取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml或10cm2），直接或处理后接种至不少于10ml的营养肉汤培养基或亚碲酸钠肉汤中，培养18耀24h，必要时可延长至48h。亚碲酸钠能抑制革兰阴性菌生长，从而有利于金黄色葡萄球菌的增菌培养。

2.分离培养 取增菌培养液划线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，培养 24耀 72h。金黄色葡萄球菌在以上两种培养基上形成的菌落特征如表8-10所示。平板上无菌落生长或生长的菌落与表8-10菌落特征不符，判供试品未检出金黄色葡萄球菌。否则进一步做下列试验。

3.纯培养、革兰染色、镜检 挑取2耀3疑似菌落分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18耀24h，取出进行革兰染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰阳性菌，无芽胞，一般不产生荚膜。排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列。

4.血浆凝固酶试验 试管法：取3支灭菌小试管，各加入血浆和0.9%无菌氯化钠溶液混合液（1∶1）0.5ml。3支管中，1支加入可疑菌株的营养肉汤培养物0.5ml（做供试品管），1支加金黄色葡萄球菌菌液0.5ml（做阳性对照），1支加0.9%无菌氯化钠溶液或营养肉汤0.5ml（做阴性对照），三管同时培养，3h后开始观察直至24h。管内血浆流动自如的为阴性反应，血浆凝固的为阳性反应。阴性管应呈阴性反应；阳性管应呈阳性反应。否则重新试验。血浆凝固酶试验是鉴定葡萄球菌有无致病性的重要试验，金黄色葡萄球菌是致病菌，可产生血浆凝固酶，使血浆凝固，应呈阳性反应。

5.结果判断 供试品培养物为非革兰阳性球菌，或血浆凝固酶试验为阴性者，报告1g、1ml或10cm2供试品未检出金黄色葡萄球菌。供试品培养物为革兰阳性球菌，血浆凝固酶试验为阳性者，报告1g、1ml或10cm2供试品检出金黄色葡萄球菌。