培养基或玻璃器皿的高压蒸汽灭菌

一、任务所需器材

1.器材：包扎好的玻璃器皿、制备好分装在三角瓶的培养基和记号笔等。

2．仪器：高压蒸汽灭菌锅、干燥箱等。

二、任务技能训练

玻璃器皿和培养基都可以用高压蒸汽灭菌锅灭菌．只是玻璃器皿在高压蒸汽灭菌后如栗外包装纸被打湿，需要用烘箱烤干，温度设置为105℃持续30min。但是培养基是不可以用干热灭菌法进行灭菌的。

1．玻璃器皿的灭菌

干燥箱由加热系统和控温系统组成。加热系统是用以提供热源以提升箱内温度的，控温系统包括自动温度调节器和温度计．是用以设定和监测箱内的实际温度的。箱顶还设有通气孔．便于水蒸气散发。有的干燥箱还装有鼓风装置，干燥箱调温的范围一般为40～180℃。干热

灭菌法适用于玻璃器皿．如试管、培养皿、三角瓶、移液管等的灭菌，其使用技术如下：

(1)装待灭菌物品

将包好的待灭菌物品(培养皿、试管、吸管等)放入电烘箱内，物品不要摆得太挤，以免妨碍热李气流通。同时，灭菌物品也不要与电烘箱内壁的铁板接触．以防包装纸烤焦起火。

(2)升温

关好电烘箱门，插上电源插头，拨动开关．旋动恒温调节器至红灯亮，让温度逐渐上升。如果红灯熄灭，绿灯亮，表示箱内已停止加温，此时如果还未达到所需的160～170℃，则需转动调节器使红灯再亮，如此反复调节，直至达到所需温度。

(3)恒温

当温度升到160～170℃时，借恒温调节器的自动控制，保持此温度。

(4)降温

切断电源，自然降温

(5)开箱取物

待电烘箱内温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。注意电烘箱内温度降到70℃以前，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。

(6)注意事项

①干热灭菌时电烘箱中物品不要摆得太拥挤，以免影响空气流通，而使温度计上的温度指示不准，造成上面温度达不到，下面温度过高，影响灭菌效果。灭菌物品不要与电烘箱内壁的铁板接触，以防包装纸烤焦。

②灭菌时温度不得超过170℃，以免包装纸烤焦；灭菌好的器皿应保存好，切勿弄破包装纸，否则会染菌。

③由于油纸在高温下会产生油滴，滴到电热丝上易着火．所以进行干热灭菌的玻璃器皿严禁用油纸包装。

④由于温度的急剧下降，会使玻璃器皿破裂．所以只有当烘箱的温度下降到70℃以下时，才可打开烘箱门。

2．培养基或玻璃器皿的高压蒸汽灭菌

高压蒸汽灭菌器是根据沸点与压力成正比设计的。其为双层金属筒结构，外筒较厚能承受较高的压力，内筒为较薄的铝筒供放置被灭菌的物品用．外筒下部装有电热管，可为灭菌器提供热源。高压蒸汽灭菌器适用于一切耐高温和潮湿的物品的灭菌，如玻璃器皿、金属器械、培养基、纱布和工作服等。使用前应先检查各部件是否正常，尤其是压力表和安全阀是否灵敏。

(1)加水。打开灭菌锅盖，将内层灭菌桶取出，向外层锅内加水使水面和三角搁架相平。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。

(2)装料、加盖。放回灭菌桶，将待灭菌物品放好。在关闭灭菌器盖的时候将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽里。再均匀拧紧锅盖上的螺栓，使螺栓松紧一致，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。

(3)排气。打开排气口(也叫排气阀)，用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和冷空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时。维持3～5min．使锅内冷空气完全排净。

(4)升压、保压和降压。当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min)后．停止加热．待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口．造成棉塞沾染培养基而发生污染。

(5)高压灭菌锅保养。灭菌完毕取出物品后．将锅内余水倒出，以保持内壁及搁架干晕，盖好锅盖。

(6)将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h．经检查若无杂菌生长，即可转入冰
培或阴凉处待用。

(7)注意事项：

①每次使用前，应保证主体内有足够水量．使水位超过电热管。

②灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的导热性不好，而且空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压．所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和水蒸气的温度，造成高压蒸汽灭菌锅内的温度不均。

③装灭菌液体时，应将溶液灌装在硬质的耐热玻璃瓶中，应不超过3／4体积。瓶口胃棉花、纱布塞好．并用纱绳扎在瓶颈上，在加热时使瓶内的空气能自然泄出，切勿使用未打孔的橡胶塞和硬木塞。最好能将玻璃瓶放在容积比较大的搪瓷或金属盘内，以防瓶子爆裂时液体流失和损坏灭菌器内壁。凡被灭菌的物品，在灭菌过程中应能直接接触饱和水蒸气，才能灭菌完全。密闭的干燥容器不宜用本法灭菌．因为容器内只能受到短时间(例如121℃，20min)的干热，达不到灭菌效果。

④无菌包不宜过大(小于50cm×30cm×30cm)，不宜过紧·各包裹间要有间隙(一般大于或等于2．5cm，即至少有空间插入伸直的手)，使蒸汽能对流，易渗透到包裹中央。物品也不能接触到灭菌桶的内壁，以防冷凝水。

⑤灭菌完成后．若压力表指针已回复零位，不易打开盖子时，将放气阀塞子置于“放气”方位，使外界空气进入灭菌器内，真空消除后，盖即可开启。

⑥橡胶密封垫圈使用日久会老化，应及时检查并定期更换。

⑦应特别注意：灭菌终了时切勿立即释放蒸汽，凡在灭菌器的压力尚未降至“0”位时，严禁开盖，以免发生事故。使用结束后应立即关闭电源。

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