细胞培养的必备实验设施

   组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持严格的无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。因此，依据组织培养技术无菌操作及体外培养细胞生长特苣和条件的要求，拥有一个无菌操作室、一台净化工作台(超净台)和一个培养箱是细胞培养的三大必备实验设施。

(一)无菌操作室(aseptic processlng room)

无菌操作室是进行细胞培养工作必不可少的无菌操作守间，其面积和结构可根据实验室条件及实验要求不同而有较大变化。为了保证“无菌空间”的基本要求，工作环境应清洁、无菌、干燥和密闭性好，并具有适宜的光线。无菌室内不应堆放杂物．禁止使用和严格处理已污染的灭菌器材和培养基；定期消毒灭菌，一般采用紫外线灯进行空气消毒。此外．无菌操作室内应保持恒定的温度和湿度，以保证实验结果的准确及工作人员的健康，可设置空气过滤净化器和恒温恒湿装置。

(二)超净工作台(净化台)

细胞培养必须达到百分之百无菌，因此单靠无菌操作室提供的“无菌”条件也不能满足要求，为此，需放置净化T作台也称超净台用于细胞培养。这种工作台占据空间小，安装方便．操作简单，净化效果好，即使不设置单独的无菌实验室，只要安装了超净工作台，也能基本满足简单的细胞培养工作要求。

超净T作台已是目前普遍应用于细胞培养的无菌操作装置。超净工作台其工作原理是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压人静压箱，再驱动空气通过高效滤器精滤后，送出的洁净气流以一定均匀的断面风速徐徐通过工作台面，从而形成无尘无菌的高洁净度空间。根据净化后气流进入工作台内的方向不同，一般分为两大类：一类是外流式，净化后气流向操作者方向流动；另一类为侧流式即净化后气流由上向下流向工作台，或从左侧或右侧通过台面流向对侧。二者各有利弊。外流式工作台因气流面向操作者流动，外方气流不易混入，保持了工作面的无菌，减少了污染的机会，但对操作者无保护作用。尤其是进行有害物质实验时，对操作者的健康不利，因此不推荐用于病毒的体外细胞培养实验中使用。此类工作台使用时一般可用有机玻璃将上半部遮挡，让气流从下方通过，以尽量减少其不利影响。对具有潜在生物危害材料的操作时，应使用Ⅱ级或Ⅲ级生物安全柜。目前很多实验室将Ⅱ级生物安全柜设为工作台，既保持了工作台无菌，又可保证操作者免受有害物质的侵害。

超净化工作台同其他精密设备一样，只有合理使用，定期维护和保养，才可以达到良好的效果并延长其使用寿命。一般应注意以下几方面：

1．超净工作台一般宜安装在避免日光直射、清洁无尘的房间内。若能放在无菌操作区内则更佳，不仅效果好，而且滤器(料)的使用寿命长。

2．新安装或长期未使用的工作台在使用前应对工作台及其周围环境进行彻底清洁和消毒灭菌。工作台过滤器和四周环境的灰尘可用真空吸尘器或不产生纤维的工具清除，灭菌处理可采用药物或紫外线灭菌法。例如，用1：1000的来苏儿或75％的酒精擦洗台面。工作台停止使用时最好用防尘布或塑料布套好，避免灰尘积聚。

3．超净工作台内不应放置其他与细胞培养无关的用品，更不能用作储存室。每次使用前半小时先开紫外线灯灭菌，再关灭菌灯启动风机，然后进行培养操作。

4．可通过T作台内的酒精灯火焰是否能摆动观察过滤器的效果。注意经常检查和更换过滤器。一般2～3年更换一次，3～6个月拆下清洗一次，以保持过滤器的净化效果。

(三)培养箱

体外培养的细胞和体内细胞一样需要在恒定的温度下生存。一般情况下，最适温度为37℃，温差变化不应超过±0．5℃。因此要求培养箱具有较高灵敏度的温控装置。培养箱分为恒温培养箱和CO₂培养箱。前者包括隔水式电热恒温箱和气套式电热恒温箱两种。均可用于体外细胞培养，并常用于细胞培养器材、试剂温度平衡。控温装置的优劣是恒温培养箱质量的关键，选购时一定要注意。一般选购隔水式或晶体管式控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。工作规模较大的实验室最好配置两台以上的培养箱，以便定期维护或突发故障时不影响工作。一般的恒温培养箱价格较便宜，但仅适用于密闭式的培养。

CO₂培养箱在细胞培养实验室已得到普遍的应用。它能提供较为恒定的CO₂，通常为5％，使培养液的pH保持稳定，适用于开放式或半开放式的培养。需要注意的是：为了避免污染，要对培养箱定期进行消毒，如有紫外灯则用紫外线消毒，如无紫外灯须用酒精定期擦拭消毒。另外，为了维持箱内温度、湿度的恒定，需向培养箱内无菌蒸馏水水槽中定期注入无菌蒸馏水，或放置无菌潮湿的纱布于培养箱托盘内，使箱内相对湿度始终保持为100％，以避免培养液蒸发而影响细胞生长。此外，不同厂家生产的CO₂培养箱安装、调试、使用、保养等要求有一定差异，购买和使用时要充分注意。

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