干细胞生物学性状鉴定(一)

  ES细胞系建立后，应及时进行鉴定。ES具有正常的整倍体核型，但在传代培养过程中可能会出现非整倍体核型。最重要的是，应经常检测干细胞的染色体组成。细胞鉴定项目如下。

一、ES的形态特征鉴定

ES呈紧密聚集生长的球形或椭圆形，细胞边缘不清楚。细胞团经消化、传代培养，分散的细胞仍会重新形成巢状的细胞团或克隆，这些细胞仍保持其多能性。如经多次消化、传代，或改变培养条件，如降低血清浓度、去除其他某些生长因子等，细胞团会松散，在球形的边缘可看到圆而大的细胞，细胞团开始自分化，形成拟胚体。此时应收集这些拟胚体进行检测和做进一步鉴定。ES中多为常染色体，胞质结构简单，散布着大量核糖体和线粒体，具有正常二倍体核型，保留了整倍体性质。

二、核型分析

ES应保持正常的整倍体核型。应经常检测ES的染色体组成，检查染色体数目或辅以畸形分析。

三、检测ES的特异性抗原标志物

检测ES的抗原标志物具有全能性的人ES表达特异性的胚胎抗原，如SSEA一3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA一1—81。而小鼠(EA)ES表达SSEA一10。SSEA一1可作为ES鉴定的标志之一，常用间接免疫荧光法进行检测。

1．试剂第一抗体为抗SSEA一1(鼠抗F9细胞的IgG型McAb)，作1：100稀释。第二抗体为羊抗鼠IgG，用若丹明标记，1：10稀释。封闭液为羊抗兔IgG。

2．方法

(1)细胞用杜氏PBS洗3次，2％Triton作用20min。

(2)再以杜氏PBS洗3次。

(3)加第一抗体，4℃孵育过夜。

(4)次日以杜氏PBS洗3次，加第二抗体(荧光标记)，30℃温育30min．再以杜氏PBS洗3次后，用甘油一PBS封片。

3．结果判定样本在激光共聚集图像分析系统下观察，依照细胞是否出现荧光作出判断。

四、巢素蛋白(nestin)检测

ES均为巢素蛋白阳性。

来源：中国微生物菌种网www.bnbio.com