细胞遗传学检测技术

  细胞培养是体外研究细胞生物学性状、遗传学及分子生物学特性最直接有效的手段。本章主要介绍培养细胞遗传学的主要检测技术，包括性染色体的检测、染色体显示、染色体显带及染色体基因定位等。对培养细胞的分子生物学检测主要包括细胞DNA检测、RNA检测及蛋白质的检测，而相关的生物学检测主要包括细胞酶学检测及细胞凋亡的检测。

组织培养细胞是研究细胞遗传最便利、最有效的方法和对象；也是揭示培养细胞性状的重要方面。人二倍体细胞具有46条染色体数就是用细胞培养法所确定出来的。当前已发展出染色体分带、姊妹染色单体分化染色、染色体原位杂交等多种技术。近年染色体荧光基因标记法又获得迅速发展，使基因作为实体得以在染色体上显现，从而填补了染色体和分子遗传学之间的空白。染色体的研究已成为组织培养技术中重要组成部分。

一、性染色体检测

(一)原理

在间期细胞核中，女性x染色质和男性Y染色质均可用特殊染色法显示出来。女性的两个x染色体中的一个，在间期时的染色质呈异固缩(heteropycnosis)，呈深染的小体称Barr氏体(图9—1)。Barr氏体位于问期细胞核内面，呈三角形或半月形小体，易为碳酸复荭等染料着色。正常女性Barr氏体阳性，男性为阴性。男性Y染色质位于间期细胞核近中央部，易为盐酸阿的平着色，荧光显微镜下观察发较强荧光，呈点状小体，发光部分系Y姿色体异固缩的长臂。初代培养细胞和二倍体细胞株均可观察到性染色质，传代细胞系表现不规律。

(二)方法

1.碳酸复红(basic fuchsin)显示x染色质法

(1)材料：盖玻片培养的细胞。

(2)染色液

储存液：称碱性复红3g，溶于1OOml 70％乙醇中，可长期保存。

工作液：(现用现配)

储存液               10．0ml

5％石炭酸水溶液      90．0ml

冰醋酸               10．0 ml 

甲醛(40％)           10．0ml

(3)染色步骤

1)细胞：盖玻片培养细胞用37℃的BSS漂洗后，立即投入染色液内染色5～lOmin(亦可先固定再染色)；如用涂片标本则应待涂片干后，迅速投入96％酒精固定10～15min后再染色。

2)分化：用96％酒精分化lmin，分化时要不断摇动，把片子上多余的染料漂洗掉。

3)脱水：通过纯酒精lmin。

4)封片：二甲苯透明2~3min，树胶封固。

(4)结果：细胞质不着色，细胞核染成紫红色；阳性Barr氏体附于细胞核膜内面呈三角或半月形小体(图9—1)。

2．荧光染色显不Y染色质法

(1)材料：盖玻片培养的细胞。

(2)染色液

PBS(pH5．5～6．6)    100．0ml

盐酸阿的平(atebrine)   0．2g

(3)染色步骤：Y染色质显示染色与染色体荧光显带法相同。

(4)结果：在荧光显微镜下观察，Y染色质呈特别明亮黄绿色荧光圆点，直径0．25～ 0．3μm，可位于核内任何位置，但以近中央时居多。

来源：中国微生物菌种网www.bnbio.com