动物细胞培养室的功能分区

动物细胞培养实验室应具备进行无菌操作、培养、准备、清洗、消毒灭菌和储存6个方面的功能。动物细胞培养实验室的6个区域最好都单独设置，分别置于相连的各个房间，特别是无菌操作室最好能单独设置；如果没有条件，可以将这些区域都安置在一个大实验室内，设计原则一般是无菌操作区与清洗、消毒灭菌区分别位于两端，无菌操作区设在室内较少走动的内侧，而准备、储存和培养区位于此两区之间，仪器设备安装排列合理，便于清洁。

1)无菌操作区

无菌操作区是只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，较易造成污染。因此，接种工作要在空气经过灭菌的环境里进行，小规模的无菌环境可利用超净工作台创造，大规模的需建无菌室。

无菌室主要用于实验材料的接种操作，所以也称接种室。理想的无菌室应有内、外两间，内间是无菌操作间，外间是缓冲间。房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。缓冲间用于准备工作，还有防止污染的作用，以保证操作间的无菌环境，同时可放置恒温培养箱以及必需的小型仪器。无菌操作间则专用于无菌操作、细胞培养，其大小要适当，且其顶部不宜过高以保证紫外线的灭菌效果；内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，墙壁光滑无死角以便清洗和消毒。工作台安置不应紧靠墙壁，台面应光滑水平，颜色为白色或灰色，以利于解剖组织及颜色观察。无菌操作间容积小且为密闭式，一般无菌操作间的空气消毒用紫外线灯，紫外线可产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康，故最好应设置空气过滤的恒温恒湿装置。有的实验室使用无臭氧紫外线消毒器或电子消毒灭菌器。电子消毒灭菌器是在高压电场作用下，电子管的内外电极发生强烈电子轰击，使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应，从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌的目的，消毒没有死角，消毒后空间内的残留臭氧只需30～40min即能自行还原成氧气，空气不留异味，消毒物体表面不留残毒。无菌室内问当设拉门，以减少空气的波动，拉门应设在离工作台最远的位置上；外问的门最好也用拉门，且应与内间的门错开，要设在距内间最远的位置上，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌：缓冲间内应该设有水槽、鞋帽架、柜子和紫外灯，备有消毒服装、鞋、帽、口罩、盆、手持喷雾器等。内间应配有工作台、紫外灯、解剖镜、各种接种器械等，工作人员进入操作间要穿上消过毒的工作服和拖鞋。

在条件比较简单的实验室，要进行组织细胞培养实验，可以采用自制的单人或双人无菌操作箱。箱内可安装紫外线灯供消毒灭菌和日光灯供照明，操作时仅双手伸入箱内，也可达到一定的无菌条件。由于箱内空气不流动，温度较高，因此操作时间不宜太长，仅可做一般的细胞培养工作。

无菌操作区的常用的设备和用具有1—2台超净工作台，配有酒精灯、镊子、剪刀、不锈钢的器具、75％的酒精棉球、特种蜡笔、铅笔、记录本、标签纸、废物筐等。无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。

2)培养区

培养区为组织细胞提供适宜温度进行培养：培养区对无菌的要求不像无菌区那样严格，但仍需清洁、无尘，因此也应设在干扰少而非来往穿行的区域。小规模的培养在恒温培养箱中进行，大规模的培养需在可控制温度的培养室中进行。为了控制培养温度，培养室最好设在阳光不能直接照射的地方，一般用拉门，以防止空气流动，并留一个通气窗，安上排气扇，室内温度由空调控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设，要光滑无死角，以便于清洁和消毒，也不易在墙角堆积灰尘。培养室外应有一预备间或走廊。建培养室成本费用较高，一般实验室多采用恒温培养箱进行培养：培养区应配有摇床、生化培养箱、CO₂培养箱等。

3)储存区

储存区用于存放无菌培养液、试剂、培养瓶和样品，要求取放物品方便，环境也需要清洁、无尘。为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的握一般为液氮温度一196℃。细胞的冻存过程需要一系列程序降温，一般为4 ℃下存放30min。转放一20 ℃ 1 h，再转入一80-一70℃过夜，之后才可以转移到液氮内(一196℃)。因此储有必须配备冰箱、低温冰箱、超低温冰箱和液氮罐等设备?

4)准备区

准备区用于配制培养液和有关培养用的液体等。应设有试剂柜、器械柜、实验台和上水道、电源等，配备的主要仪器设备有水纯化装置、天平、微波炉、pH计、抽气泵、电炉、培养分装器、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶等。在有天平、pH计、磁力拌器等设备下完成制备以后，应在无菌操作台进行过滤除菌。液体制备直接关系组织细胞养的成败，因此必须严格无菌操作。

5)清洗区

清洗区用于洗刷所有细胞培养器皿等，在实验室的一侧应设置专用的洗涤水池，用来洗玻璃器皿，备有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等，中央实验台还应配置小水槽，用来清小型玻璃器皿。清洗区应配有柜子、加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，有条件可配置玻器皿清洗机，此外还应配置落水架、干燥箱、超声波清洗器等。清洗区地面应耐湿，设置地并排水良好。

6)消毒灭菌区

直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。消毒灭菌区主要用于培养液的灭和各种器具的消毒灭菌，应备有高压蒸汽灭菌锅、细菌过滤设备、电热干燥箱、消毒柜、排风火设备等。

清洗和消毒灭菌区应与其他区分开。

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