完全培养基的配制

  1)训练目的

掌握完全培养基的配制方法和无菌处理方法。

2)实验材料

①器材：容量瓶(1 000 mL)、青霉素瓶、一次性0．22 μm塑料微孔滤膜。

②试剂：小牛血清、青霉素、链霉素、DMEM基础培养基。

3)操作步骤

①加小牛血清。根据基础培养基配制的量将小牛血清分装，冷冻保存(一20℃)。l临用前加入小牛血清(10％一20％)。

②加抗生素。一般抗生素终浓度为青霉素100 U／mL，链霉素100 U／mL。市售青霉素为80xlO⁴U／瓶，可溶于4mL体积，每升培养液中加0．5 mL即可。市售链霉素为lOOxlO⁴U／瓶，可溶于5 mL体积，每升培养液中加O．5 mL即可。无链霉素的情况下，可用庆大霉素代替，终浓度为50～200 u／mL。

如配制100 mL的完全培养基，则需DMEM基础培养基90 mL、小牛血清10 mL、青霉素100 U／mL、链霉素100 U／mL。

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