微生物大小的测定方法

一.基本原理

微生物细胞大小是微生物的基本形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小，只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺(图7-1)。

镜台测微尺(图7-1A)是中央部分刻有精确等分线的载玻片。一般将1mm等分为100格(或2mm等分为200格)，每格长度等于O.01mm(即10μm)，是专用于校正目镜测微尺每格的相对长度。

目镜测微尺(图7-1B)是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，有等分50小格或100小格两种，每5小格间有一长线相隔。由于所用接目镜放赶倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同，因此，目竟测微尺不能直接用来测量微生物的大小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为(0.7～0.8)μm×(2～3)μm。

二.器材

菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的玻片标本，酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。

仪器或其他用具：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、擦镜纸、香柏油等。

三.操作步骤

1．装目镜测微尺

取出接目镜，把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上，然后旋上目镜透镜，最后将此接目镜插入镜筒内(图7—1B)。

2．目镜测微尺的校正

(1)放置镜台测微尺 将镜台测微尺置于显微镜的载物台上，使刻度面朝上。

(2)校正 先用低倍镜观察，将镜台测微民有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合，然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数(图7一1C)。同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。观察时。光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度；换高倍镜和油镜校正时，务必十分细心，防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。

3．计算

由于已知镜台测微尺每格长10μm，根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重台线之间各自所占的格数，通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度。

菌体大小的测定，目镜测微尺校正后，移去镜台测微尺，换上细菌染色玻片标本。先用低倍镜和高倍镜找到标本后，换油镜校正焦距使菌体清晰，测定细菌的大小。测定时，通过转动目镜测微尺(或转动染色标本)，测出杆菌的长和宽(或球菌的直径)各占几小格，将测得的格数乘以目镜测微尺每小格所代表的长度，即可换算出此单个菌体的大小值。在同涂片上需测定10～20个菌体，求出其平均值，才能代表该菌的大小，而且一般是用对数生长期的菌体来进行测定。测定酵母菌时，先将酵母培养物制成水浸片，然后用高倍镜测出宽和长各占目镜测微尺的格数，最后，将测得的格数乘上目镜测微尺(用高倍镜时)每格所代表的长度，即为酵母菌的实际大小。

测定完毕，取出目镜测微尺，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦拭干净后。放回盒内保存。

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