蜡状芽孢杆菌发酵液的制备

1．蜡状芽孢杆菌发酵生产的一般工艺流程

斜面菌种活化→三角瓶种子制备→接种→发酵培养基的制备→发酵罐发酵→发酵过程控制→放料

2．斜面菌种活化

将蜡状芽孢杆菌的保藏菌种采用划线接种的方法在芽孢杆菌试管斜面培养基上划线接种，于30。C培养18 h，使蜡状芽孢杆菌活化；蜡状芽孢杆菌培养基为：蛋白胨5g、葡萄糖5 g、牛肉膏5 g、磷酸二氢钾3 g、水1 000 mL、琼脂15～20 g、pH7．5～7．6，121℃灭菌30 min。备用。

3．三角瓶种子制备

从活化的蜡状芽孢杆菌试管斜面菌种接种到芽孢杆菌液体培养基中，于32℃培养30 h，得到蜡状芽孢杆菌摇瓶种子液；所述的芽孢杆菌液体培养基为：蛋白胨5 g、葡萄糖20 g、牛肉膏5 g、磷酸二氢钾6 g、3．08％硫酸锰溶液1 mL、pH 7．5～7．6，121℃灭菌30 min。

4．生产一级种子液

先按照后述的配方配制一级种子液体培养基，pH 7．5～7．6，经12l ℃，灭菌45 min，冷却到37℃，然后将得到的蜡状芽孢杆菌三角瓶种子液以3％～10％的接种量，分别接种于生产所用的一级种子罐中，于37℃培养24 h，搅拌速度200 r／min，通气量为2 VVm[指单位时间(min)单位发酵液体积(m³)内通入的标准状态下的空气体积(m³)]，得到蜡状芽孢杆菌的一级种子液；所述的一级种子液体培养基配方为：120目豆粕粉10 g、120目鱼粉10 g、120目玉米面5 g、葡萄糖20 g、NaCl 2 g、NaOH O．8 g、Na2HPO4 3 g、增效剂 1 g、消泡剂O．8 mL，增效剂主要由MgSO₄、ZnSO₄、FeSO₄、CUSO₄、MnS0₄等组成.

5．二级发酵
   
将蜡状芽孢杆菌一级种子以lO％体积的比例接种到装有生产发酵培养液的发酵罐中，发酵培养液的配方和控制条件同步骤3，发酵16 h后停机，得到蜡状芽孢杆菌的二级种子。在工业生产时，当需要更大规模(如20 t以上发酵罐)的生产量时，还要进行三级发酵。

6．三级发酵

将蜡状芽孢杆菌二级种子以5％体积的比例接种到装有生产发酵培养液的三级发酵罐中，发酵培养液的配方和控制条件同步骤3，发酵20 h后通过显微镜观察，有大量芽孢形成时停机，得到蜡状芽孢杆菌发酵液。

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