降解用微生物的形态研究

     细菌是单细胞微生物，它的形态就是细胞的形态。其主要形态有球、杆、螺旋状，分别被称为球菌、杆菌和螺旋菌。

     菌落的形态特征包括菌落的大小、形状(表面状态、边缘状态、隆起状态)，表面的光泽、质地、颜色、透明度、厚度等。

     纯培养微生物，以获得纯种。可以通过染色，在生物、光学、显微镜下观察微生物的形态和结构，进行微生物的区分与鉴定工作。对于细菌，可通过各种染色法进行辨别。

1．芽孢染色方法

主要是对真菌类芽孢进行染色，方法如下：

(1)涂片：以灭菌接种环挑取生理盐水一环置载玻片中央或略偏右侧，从PDA平板上挑取单个纯菌落在盐水中轻轻磨匀，使其呈轻度乳白混浊，置室温下自然干燥。

(2)初染：加石炭酸复红液，并以弱火加热，使染液冒蒸汽约 5min，冷后水洗。

(3)脱色：用95％的酒精滴洗涂片处，脱色 2min，水洗。

(4)复染：用碱性美兰复染 30s，水洗，风干后镜检。

(5)镜检：低倍镜下找到标本后，油镜观察并摄影。

2．真菌的生理生化反应

真菌的生理生化反应是利用其基本原理——Bavendamm 变色反应，即黄孢原毛平革菌的特征反应。

3．不染色镜枪法(压滴法)

不染色镜检可用于观察细菌的生活状态，一般常用来检查细菌的动力。

     以灭菌接种环取菌液2环置洁净载玻片中央(观察固体培养菌时，在载玻片上滴加1～2滴蒸馏水和生理盐水，再挑取菌落涂匀)；取一洁净盖玻片，使盖玻片一边接触菌液，缓慢放下覆盖于菌液上，勿使产生气泡，也不要使菌液外溢。静置数分钟后镜检。

4．革兰氏染色法

     该方法由丹麦细菌学家 Cheistian Gram 首创，采用革兰氏染色法不仅可以观察到细菌的形态、排列和特殊构造．还可以鉴别细菌的种类。

革兰氏染色方法与步骤如下：

(1)以灭菌接种环挑取生理盐水一环置载玻片中央或略偏右侧，从球红假单胞菌固体培养基平板上挑取单个纯菌落在盐水中轻轻磨匀。使其呈轻度浮白浑浊，置室温下自然干燥。

(2)初染：在一个固定的图片E滴加结晶紫染液2～3滴，染色lmin后．用流水冲洗干净剩余染液，甩干。

(3)媒染：滴加革兰氏碘液数滴，1min后，水洗、甩干。

(4)脱色：再滴加数滴95％酒精脱色，轻轻摇动玻片，直至无紫色水酒精脱落为止，时间约O．5～1min，水洗、甩干。

(5)复染：滴加稀释番红染液数滴，染色O．5～lmin，水洗,待干后镜检。

(6)镜检：低倍镜下找到标本后，油镜观察并摄像。

     通过革兰氏染色法可将细菌分成两大类：不被乙醇脱色仍保留紫色，为革兰阳性菌，用 G⁺ 表示；被乙醇脱色后再被番红复染成红色，为革兰氏阴性菌，用 G^一 表示。

5．鞭毛镀银染色法

染液：分为甲、乙两种染液。

甲液：鞣酸 5g，FeCl₃ 1．5g，15％ 甲醛溶液 2mL，l％ NaoH 1mL，蒸馏水100mL。

乙液：将 2g 硝酸银溶于100mI，蒸馏水中，取 90mL 硝酸银溶液并滴入浓氢氧化铵使其形成浓厚的沉淀，继续滴加氢氧化铵至沉淀开始溶解成为澄清溶液为止。然后将剩余的10mL硝酸银溶液慢慢滴人，则出现薄雾，轻轻摇动至雾状沉淀消失。再滴人硝酸银溶液，直至摇动仍是呈现轻微稳定的薄雾状沉淀为止。若出现重雾为银盐析出，不宜使用。

染色法：

(1)用接种环取培养1 6～24h的细菌少许，轻沾于光滑洁净载玻片一端的蒸馏水滴中，倾斜玻片使菌液随水滴流至另一端，然后平放在空气中自然干燥，勿用火焰固定。

(2)滴加甲液染3～5min，用蒸馏水冲洗。

(3)用乙液冲去残水，加乙液染0．5～1min，并在火焰上方稍微加热，再用蒸馏水冲洗，待干后镜检。菌体呈浅褐色，鞭毛为深褐色。

来源：中国微生物菌种网 www.bnbio.com