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608 人阅读发布时间:2016-06-03 17:02
质谱技术在蛋白质分析中的应用标志着蛋白质组研究的真正繁荣。日本科学家田中耕一与美国科学家约翰·芬恩因一同发明了“对生物大分子的质谱分析法”获得了2002年的诺贝尔化学奖。对于蛋白质的质谱分析有两种最基本的方法,一种是将整个蛋白用电喷雾离子化(electrospray ionization,ESI)或基质辅助激光解析电离(matrix.assisted laser desorption ionization,MALDI)方法离子化,然后导入质谱仪进行分析。这种方法通常被称作自上而下(top-down)分析法。
另一种方法是先将蛋白用胰蛋白酶等酶解为较小的多肽片段,这些多肽然后被引入质谱分析仪进行一级乃至串级质谱分析,最后根据分析到的多肽片段推断可能存在的蛋白。这一类分析方法通常被叫做自下而上(bottom—up)分析方法。
值得注意的是,自上而下与自下而上的蛋白质质谱分析方法对于质谱仪的要求是有区别的。自上而下分析方法要求质谱仪有较宽的质量数分析范围,因此一般采用飞行时间质谱(time-0f-flight,TOF MS),或傅立叶变换离子回旋共振(Fourier transform ion cyclotron resonance,FT-ICR)质谱分析。
而对于自下而上的质谱分析方法,基质辅助激光解析电离时间飞行质谱仪是使用得最多的仪器。因为该类仪器可以快速地获取肽段的质谱指纹信息,而这些信息是鉴定多肽的关键信息。此外,四形矩飞行时间和四极离子阱质谱仪也经常被用于肽段质谱分析。
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