菌种和核酸样品保藏的穿刺法

    穿刺法操作简便，是短期保藏菌种的一种有效方法。

    (1)接种培养。培养试管选用带螺旋帽的短试管或用安瓿管(一般指密封的玻璃小管，也有携料类型的)、艾本德(Eppendorf)管等(图3-17)。

    (2)将培养好的穿刺管盖紧，外面用石蜡膜(parafilm)封严，置4℃存放。

    (3)取用时将接种环(环的直径尽可小些)伸入菌种生长处挑取少许细胞，接人适当的培养基中，穿刺管封严后，保留以后再用

    4．滤纸法

    1)滤纸条的隹备

    将滤纸剪成0．5cm×1．2cm的小条装入0．6cm×8cm的安瓿管中，每管装2片，用棉花塞上后经121℃灭菌30min。

    2)保护剂的配制

    配制20％脱脂奶，装在三角烧瓶或试管中，112℃灭菌25min。待冷却后，随机取出几份，分别置28℃和37℃培养过夜，然后各取0．2mL，涂布在肉汤平板上或斜面上进行无菌检查，确认无菌后方町使用，其余的保护剂置4℃存放待用。

    3)菌种培养

    将需保存的菌种在适宜的斜面培养基上培养，直到生长半满。

    4)菌悬液的制备

    取无菌脱脂奶约2～3mL加入待保存的菌种斜面试管内。用接种环轻轻地将菌苔刮下，制成菌悬液。

    5)分装样品

    用无菌滴管(或吸管)吸取菌悬液滴在安瓿管中的滤纸条上，每片滤纸条约0．5mL，塞上棉花。

    6)干燥

    将安瓿管放人有五氧化二磷(或无水氯化钙)作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。

    7)熔封与保存用火焰按图3-18将安瓿管封口，置4℃或室温存放。

    8)取用安瓿管

    使用菌种时，取存放的安瓿管按图3-19(a)用锉刀或砂轮从上端打开安瓿管，即用一只握住锉刀或砂轮不动．另一只手把安瓿管沿顺时针或逆时针转一圈，在划割处包上一层纸后，两拇指抵住一侧划割端，用力一推即可折断；也可按图3-19(b)将安瓿管口在火焰上烧热，加一滴冷水在烧热的部位使玻璃裂开，敲掉口端的玻璃，用无菌镊子取出滤纸，放入液体培养基中培养或加入少许无菌水用无菌吸管或毛细滴管吹打几次，使干燥物很快溶解后吸出，转入适当的培养基中培养。

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    来源：国家微生物菌种网 www.bnbio.com