复苏细胞切记6点

　　细胞有两种存在状态：复苏的和冻存的。细胞一般是以冻存的方式进行存储，实验的时候需要将冻存的细胞转为复苏状态。

　　复苏细胞不是简单的将冻存细胞拿出来就可以，复苏过程如果操作不当就会影响细胞状态，甚至会导致整个细胞凋亡。

　　一般买冻存的细胞，都会附有复苏说明书。那么一般的细胞都可按下面步骤复苏细胞：

　　1、将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

　　2、将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，避免引起污染。

　　3、用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

　　4、800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

　　5、将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

　　6、第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

　　切记：对DMSO不敏感的细胞在复苏时也可不离心，减少操作步骤，也可降低污染的几率。将解冻的细胞悬液直接转移至T25细胞瓶内，补加新鲜培养基，放入温箱内培养。但培养12~20h后必须换新鲜的培养基，移除死细胞。

　　来源：北京标准物质网 www.biaowu.com 

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