微生物分离技术

1．斜面接种法

斜面接种法指从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。斜面接种主要用于菌种的活化、扩大以及保藏。斜面接种操作如图3．11所示。

步骤如下：

①点燃酒精灯。

②接种的时候，左手持试管，将菌种管(菌种斜面培养基)和接种管(待接种的新鲜斜面培养基)用大拇指和其他四指握住，中指位于两管之间的部位。无名指和大拇指分别夹住两试管的边缘，管口齐平，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45°～50°角，斜面应该面向操作者，操作者能清楚地看到两个试管的斜面．注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。

③接种环灼烧灭菌：右手拿接种环柄(如同握钢笔一样)，将接种环垂直插入酒精灯火焰外焰中烧红，镍铬丝部分(环和丝)必须烧红．以达到灭菌目的．再斜向横持接种环，将接种环接头螺纹处旋转灼烧，使其金属杆部分来回通过火焰2～3次。凡接种时要进入试管的部分都要经过酒精灯火焰的充分灼烧灭菌。以下操作都要使试管口靠近火焰旁(即无菌区)进行。

④拔管塞：用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)．以杀灭可能沾污的微生物。棉塞应始终夹在手中，如掉落应更换无菌棉塞。

⑤取菌：将灼烧过的接种环伸人菌种管内，在管壁上停留片刻(10s)或轻触一下没长菌的培养基部分．使其冷却以免烫死菌体．用环轻轻取少许菌种或孢子，慢慢退出，不要使接种环碰到管壁．也不能通过火焰。

⑥接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸人待接斜面管。从斜面底部开始，在斜面上轻轻做z形来回划线至斜面顶部，将菌种接种于其上。注意勿将培养基划破，不要使菌体沾污管壁。

⑦塞管塞：接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，灼烧试管口，并在火焰旁迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后．放回原处。塞棉塞时不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时候纳入不洁的空气。酒精灯火焰周围是无菌区域，无菌操作要在此范围内操作，离火焰越远受污染的可能性越大。

⑧接种完毕，接种环上的余茵必须灼烧灭菌后才能放下。再将棉花塞旋紧。将所接种的斜面贴上标签(贴在试管离试管口2～3cm的部位，若用记号笔标记则不需要标签)，注明菌种、名称、接种日期、接种者姓名，置适温下培养观察。

2．液体接种法

这是由斜面菌种或液体菌种接种到液体培养基(如试管或锥形瓶)中的方法。主要用于微生物的增殖培养，也可用纯培养物接种液体培养基．进行生化试验。

(1)斜面接液体

①灼烧接种环、拔塞、取菌等的操作要求与斜面接种相同。但要注意管口略向上倾斜，以免培养基流出。

②将取有菌种的接种环迅速移到液体培养基中，应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即
可，使菌体分散于液体中。接种后，塞上塞子，将液体培养基轻轻摇动，使菌体均匀分布于培养基中，以利于生长。灼烧接种环，放回原处。在接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物，可用接种钩或接种铲进行。

③贴上标签，注明菌种、名称、接种日期、接种者姓名，适当条件下培养观察。

来源：中国微生物菌种网www.bnbio.com