食品卫生微生物学检验志贺氏菌

食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验标准操作规程

一、范围

本规程适用于食品卫生微生物学检查志贺氏菌检验的测定。

二、依据

本规程依据《食品安全国家标准 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验》(GB／T4789．5-201 2)．

三、操作步骤

(1)增菌以无菌操作取检样25g(mL)，加入装有灭菌225mLGN增菌液的均质杯，用旋转刀片式均质器以800O～10000r／min均质；或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1～2min，液体样品振荡混匀即可。于(41．5±1)℃，厌氧培养1 6～20h。

(2)分离和初步生化试验

①取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC(麦康凯)琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上．于(36士1)℃培养20～24h．观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏菌、志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察．则继续培养至48h再进行观察。

②自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI(三糖铁)、葡萄糖半同体和营养琼脂斜面各1管．置(36±1)℃培养20～24h，分别观察结果。

③凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸(发酵葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖)、不产气、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其②中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。

(3)生化试验用(2)一②中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即β-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验。除宋内氏菌、志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性；宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1型，鲍氏志贺氏菌13型的p一半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似。必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。

四、操作程序

志贺氏菌检验程序见图5一7。

五、结果与报告

综合生化和血清学的试验结果判断菌型并做出报告。

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