活性污泥生物相的观察

一、任务所需器材

活性污泥混合液、显微镜、载玻片、盖玻片、血球计数板、测微尺(镜台、目镜)，活性污泥。

二、任务技能训练

(一)采样

采集的活性污泥样本位置和监测活性污泥沉降比一样都是来自曝气池末端的混合液，此位置的活性污泥混合液不论从活性污泥的稳定性、絮凝性、种群数量还是原生动物代表性来讲都是最佳的。首先，在曝气末端，活性污泥处于减速增长期-活性污泥活性降低，稳定性就变得更好。其次，活性污泥处于减速增长期，表现的活性污泥沉降性就更明显，自然絮凝性就更佳。

这里指的还是原、后生动物种群，微生物的主体细菌种群不在讨论之列。活性污泥中原、后生动物种群在曝气池前端是非活性污泥类原生动物占优势，在曝气池中段是中间性活性污泥原生动物占优势．而曝气池末端占优势的原生动物种类决定了活性污泥生物相所具有的功能性状。在此位置采集的活性污泥混合液进行生物相显徽镜观察，其结果更具代表性。

(二)玻片标本制备

1．取活性污泥曝气池混合溶液一小滴于载玻片中央。

2．盖上盖玻片，不要产生气泡，四周若有多余溶液，用吸水纸吸去。如是生物膜标本，可用镊子去小块生物膜，用蒸馏水稀释后再制片。

3．显微镜观察并绘图

(1)低倍镜观察

观察生物相的全貌，注意活性污泥的大小、松紧程度等，以及菌胶团和丝状菌的比例等，加以记录。观察微型动物的种类、活动状况并对主要种类进行计数。

(2)高倍镜观察

用高倍镜观察可以看清微型动物的结构特征，观察时注意微型动物的外形和内部结构，如钟虫体内是否存在食物泡．纤毛环是否摆动等。观察菌胶团时，要注意胶质的颜色、厚薄等；观察丝状菌时要注意其生长状况。

4．微型动物的计数

(1)稀释

视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释(斜面一般稀释到10^-2)，以每小格的菌数可数为度。

(2)镜检计数室

取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

(3)加样

将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的加大。然后加盖盖玻片(勿产生气泡)。

(4)显微镜计数

静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

血球计数板是一块特制的精密载玻片，其构造见图5．9。在载玻片上有4条长槽，将玻片中间区域分隔成3个平台，中间平台比两边的平台低0．1mm，此平台中间又有一条短槽将其分隔成2个短平台，在2个平台上各有1个相同的方格网。它被划分为9大格，其中央大格即为计数室，如图5．9(c)所示。该计数室又被精密地划分为400个小格，但计数室还有25个中格(为16小格／每中格)或16个中格(为25小格／每中格)两种规格，每中格的四周均有双线界限标志，以便在显微镜下区分．如图5．10所示。

因此，两种中格类型计数室的总体积是一样的。即计数室大方格的边长为1mm，故面积为1mm²，计数室与盖玻片问的深度为0.1mm，所以计数室的体积为O．1mm³。计数时，先计得若干(一般为5个)中格内的含菌数，再求得每中格菌数的平均值，然后乘以中格数(16或25)，就可得出l大方格(0．1mm³)计数室中的总菌数，若再乘以10⁴⁽换算戚每毫升的含菌量)及菌液的稀释倍数，即可算出每毫升原菌液中的总菌数值。

(5)清洗血球计数板

测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放人盒内保存。将实验结果填人表5．11中。

五、讨论

活性污泥或生物膜中有哪些微生物?对系统运行状况有何指示作用?

六、复习思考题

1．使用油镜前为什么要先用低倍镜和高倍镜检查?

2．试分析比较所学过的两种微生物计数方法的优缺点。

3．根据你的实验体会，说明用血球计数器计数的误差主要来自哪些方面?应如何减少误差，力求准确?

4．检查活性污泥或生物膜的生物相有何实际意义?

七、自我评价表(表5.12)

来源：中国微生物菌种网www.bnbio.com