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473 人阅读发布时间:2015-09-28 15:14
鉴定细胞系是使用细胞系的前提,经鉴定的细胞系才能与国际上知名和确认的细胞库进行交流或被接纳。美国典型培养物保藏中心(American Type culture Collestion,ATCC)对细胞系的检测项目要求如下。
1.组织来源和已传代数应说明细胞供体所属物种(如来源于人、鼠或其他动物),以及个别性别、年龄、取材的器官和组织。肿瘤组织应说明临床病理诊断及病历号。说明组织培养的传代情况。检测细胞系的常用和权威方法是染色体分析、同工酶分析和DNA指纹技术等。
2.明确细胞系组织来源是上皮细胞还是成纤维细胞。用检测细胞表面标记的方法可证明重要的组织特异性。上皮细胞的细胞骨架抗体、成纤维细胞生长因子(fibroblast growthfactor,FGF)抗体等对上皮来源组织和结缔组织是有用的。
3.细胞系是否是正常细胞,有无发生恶性转化,需经染色体核型分析判明。正常细胞为二倍体特征,恶性转化细胞为异倍体。用染色体分带技术可更细微地检测染色体有无异常。
4.培养条件及方法说明细胞系所用的培养液、血清种类及用量、生长因子等用量、抗主素、适宜pH等。
5.细胞生长情况包括细胞活力、细胞生长曲线、分裂指数、细胞倍增时问等。另外.细胞饱和密度生长、接触性抑制、停泊依赖生长特点等均可作为正常细胞无恶性转化的酱标。
6.细胞的冻存与复苏包括冻存液、冻存方法及细胞溶解后的生长特性。
7.细胞有无交叉污染检测同工酶谱是鉴定细胞有无交叉污染的快速、有效的方法。主要检测G6PD和LD,DNA指纹也可用于鉴定。
8.无菌检测包括细胞有无细菌、真菌、支原体和病毒的污染。
9.反转录酶的检测也是证明有无逆转录病毒污染的方法。
10.注明细胞系建立者、检测者和鉴定组织。
来源:中国微生物菌种网www.bnbio.com