人胚肺二倍体细胞培养

  具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同(2n细胞占75％或80％以上)的细胞群，称二倍体细胞。二倍体细胞在正常情况下具有限生命期，故属有限细胞系。随供体年龄和组织细胞的不同，二倍体细胞的寿命长短各异。人胚肺成纤维细胞可传50～60代，人胚肾只有8～10代，人胚神经胶质细胞15～30代；如从老龄个体取则细胞生存期更短。由不同年龄供体取材建立的二倍体细胞系可供研究衰老之用。为保持二倍体细胞能长期被利用，一般在初代或2～5代即大量冻存作为原种(stook cells)，用时再进行繁殖，用后再继续冻存，可供长期使用或延缓细胞的衰老。

一、材料与试剂

1．肺组织来自水囊引产或自然流产的妊娠14～18周的胎儿。

2．培养液 常使用含10％～20％胎牛血清的DMEM培养液(100U／ml青霉素、100μg／ml链霉素)。

3．消化液使用O．25％胰蛋白酶。

4．清洗液Hanks液+100U／mI青霉素+100μg／ml链霉素。

5．器材解剖刀、镊子、眼科剪、100目筛网、恒温电磁搅拌器、平皿、培养瓶等。

二、操作方法

1．用75％乙醇消毒胸部，剖胸取出两肺，剔除支气管等组织，将肺边缘组织放入无菌平皿中，用清洗液充分洗净血液。选择苍白色的肺组织，剪成1～2mm³大小的组织块，用清洗液洗2～3次，洗净血细胞，静置一段时间后弃上清液。

2．将肺组织块移人装有磁力棒的==角烧瓶中，加入5～6倍体积的O．25％胰蛋白酶，置37℃恒温电磁搅拌器上消化，即热消化；或将装有胰酶和组织块的三角烧瓶置于4℃冰箱内消化过夜，次日取出，弃胰酶，即为冷消化。

3．向三角烧瓶中加入一些培养液，吸管吹散细胞。

4．静置片刻，以沉淀未消化完全的组织块。吸出细胞悬液，用100目筛网过滤。

5．细胞计数，调整细胞浓度大约3×10⁶个／ml．接种于细胞培养瓶常规培养。24h后换液，以后每隔2～3d换液一次。

三、结果观察

一般在培养3～7d后可长成单层细胞。镜下观察，第一、第二代细胞常呈梭形或不规则三角形，混杂有少量上皮样细胞，而继续培养后细胞多由成纤维细胞构成。

来源：中国微生物菌种网www.bnbio.com