集落刺激因子((2SF)活性测定

  (一)原理

集落刺激因子(colony stimulating factor，CSF)是指能够刺激多能造血干细胞和不同发育分化阶段造血干细胞增殖分化，在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。主要包括：于细胞生成因子(SCF)多能集落刺激因子(IL一3)、巨噬细胞集落刺激因子(M—CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)和红细胞生成素(EPO)。上述集落刺激因子除具有刺激不同发育分化阶段造血干细胞增生分化的功能外，其中有些还能促进或增强巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬杀伤功能。M07e细胞株对GM～CSF和IL一3存在生长依赖，且呈剂量依赖。因此可作为指示细胞来测定待检样品中GM～CSF的水平。

(二)材料

1．GM—CSF待测样品，用10％FCSRPMI 1640培养液倍比稀释。

2．GM—CSF标准品。

3．Mo7e细胞株。

4.10％FCS DMEM培养液(含10 ng／ml rGM CSF和0．5 ng／ml IL 3)。

5．³ HTdR(0．5 μci／50μl)。

6．闪烁液。

7．9999型玻璃纤维滤纸。

8．细胞收集仪。

9．B液闪计数仪。

(三)方法

1．用lO％FCSDMEM培养液洗涤M07e细胞2次，调整细胞浓度至2×10⁵／ml，96孔培养板中每孔加入100μl(1×10⁴／孔)。

2．GM—CSF标准品和待测样品经倍比稀释后加入96孔培养板，另每个样品孔中加入抗IL一3单克隆抗体。各稀释度设3个复孔。37℃、5%、CO₂孵箱中培养72 h。

3．每孔加³ H—TdR 0．5 μci，37℃、5％C0₂孵箱中培养4～6 h。

4．用细胞收集仪收获细胞于玻璃纤维纸上。

5．干燥后，移入液闪瓶中，加入1 ml闪烁液，于液闪仪中测β射线的cpm值。

(四)结果分析

参照GM—CSF标准曲线，可得出样本GM—CSF活性。 


来源：中国微生物菌种网www.bnbio.com