淋巴细胞微核实验

微核与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质内，因其比主核小，故称微核。

微核试验优点是操作简便，容易观察，具有分裂能力的培养细胞均可用于显示微核。选择细胞较大，细胞质丰富，细胞质完整的双核淋巴细胞，微核游离于细胞质中与主核完全分开，着色与主核一致或略浅，大小为主核的1／3以下。一般需要计数2000个细胞。

一、实验材料

1．受试材料人外周血。

2．RPMll640培养，含20％小牛血清。

3．KCl低渗液 配制75mmol／L KCl水溶液。

4．固定液(甲醇：冰醋酸一3：1)。

5．Glemsa染液。

6．松胞素(Cyt—B)6μg／ml。

二、实验方法

1．常规外周血37℃培养96小时，不加秋水仙素。

2．将培养物移人离心管中，1000r／min，离心8min，弃上清液。

3．每管加入75mmol／L KCl溶液3ml，37℃低渗处理3min。

4．每管加入甲醇冰醋酸(3：1)固定液l ml，轻轻打匀预固定。

5．1200r／min，离心8min，弃上清液。

6．每管加上述固定液3 ml，置室温固定：3min。

7．1000 r/min，离心8min，弃上清液加少许固定液混匀滴片。

8．10％Giernsa染色10min。

三、结果分析

微核计数的标准：

1．微核着色深浅与主核相同。

3．位于胞浆内。

4．与主核不连接(以区别主核的突起)。

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