0．25％胰蛋白酶的配制

  1)训练目的

掌握0．25％胰蛋白酶的配制方法和无菌处理方法。

2)实验原理

0．25％胰蛋白酶常用来离散组织获得单个细胞，或者消化需要传代的贴壁细胞。培养基则为细胞生长提供必需的营养物质，是细胞赖以生存的重要支持物，胰酶液必须采用微孔滤膜过滤除菌。

3)实验材料①器材：pH计、烧杯(1 000 mL)、容量瓶(1 000 mL)、青霉素瓶、一次性O，22μm塑料微孔滤膜。

②试剂：7．4％NaHCO₃、胰蛋白酶干粉(1：250)、D-Hank’s液。

4)操作步骤

①准确称取胰蛋白酶干粉250 mg于无菌烧杯中，先用灭菌的D—Hank’s液调成糊状，然后再补足灭菌的D-Hank’s液至100 mL，搅拌混匀，置磁力搅拌器上搅拌至溶解(室温和4℃间断进行，室温高于30℃要减少酶液在室温中的搅拌时间)。

②过滤除菌。分装入青霉素瓶中(每瓶1—5 mL)，低温冰箱(一20℃)保存备用。配制好的胰蛋白酶溶液往往偏酸，在使用前可用无菌7．4％NaHC0₃溶液调pH至7．2左右。

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