显微观察样品的制备

样品制备是显微技术的一个重要环节，直接影响着显微观察效果的好坏。一般来说，在利用显微镜观察、研究生物样品时，除要根据所用显微镜使用的特点采用合适的制样方法外，还应考虑生物样品的特点，尽可能地使被观察样品的生理结构保持稳定，并通过各种手最提高其反差。

一.光学显微镜的制样

光学显微镜是微生物学研究的最常用工具，有活体直接观察和染色观察两种基本使用方法。

1．活体观察

可采用压滴法、悬滴法及菌丝埋片法等在明视野、暗视野或相差显微镜下对微生物活体老行直接观察。其特点是可以避免一般染色制样时的固定作用对微生物细胞结构的破坏，并亏用于专门研究微生物的运动能力、摄食特性及生长过程中的形态变化如细胞分裂、芽孢萌发等动态过程。

(1)压滴法将菌悬液滴于载玻片上，加盖盖玻片后立即进行显微镜观察。

(2)悬滴法在盖玻片中央加一小滴菌悬液后反转置于特制的凹玻载片上后进行显微镜观察。为防止液滴蒸发变干，一般还应在盖玻片四周加封凡士林。

(3)菌丝埋片法将无菌的小块玻璃纸铺于平板表面，涂布放线菌或霉菌孢子悬液，经培养，取下玻璃纸置于载玻片上，用显微镜对菌丝的形态进行观察。

2．染色观察

一般微生物菌体小而无色透明，在光学显微镜下，细胞体液及结构的折射率与其背景相差很小，因此用压滴法或悬滴法进行观察时．只能看到其大体形态和运动情况。若要在光学显微镜下观察其细致形态和主要结构，一般都需要对它们进行染色，从而借助颜色的反衬作用提高样品不同部位的反差。

染色前必须先对涂在载玻片上的样品进行固定，其目的有二：一是杀死细菌并使菌体附着于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。常用酒精灯火焰加热和化学固定两种方法。固定时应注意尽量保持细胞原有形态，防止细胞膨胀和收缩。

(二)电子显微镜的制样

生物样品在进行电镜观察前必须进行固定和干燥，否则镜筒中的高真空会导致其严重脱水，失去样品原有的空间构型。此外，由于构成生物样品的主要元素对电子的散射与吸收的能力均较弱。在制样时一般都需要采用重金属盐染色或喷镀，以提高其在电镜下的反差，以形成明暗清晰的电子图像。

来源：中国微生物菌种网 www.bnbio.com