母种生产——培养基制作

    母种生产应当按照农业部《食用菌菌种生产技术规程》生产，并建立母种生产档案，载明生产地点、时间、数量、培养基配方、培养条件、母种的种源、操作人、技术负责人、检验记录、母种流向等内容。生产档案应当保存至母种售出后2年。

(一)培养基制作

    母种培养基一般采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)或综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基(CPDA)，特殊菌类需要加入其生长所需的特殊物质，如酵母粉、蛋白胨、麦芽汁、麦芽糖等，但要适量，不应过多，并严格掌握pH值。

1．培养基材料与配方

(1)母种培养基材料

    PDA培养基与CPDA培养基使用的材料、作用及其要求如下：

    ①马铃薯：提供食用菌菌丝生长所需的全面营养，选用新鲜、无变绿、无发芽、无霉烂、无病斑、嫩黄色的薯块。

    ②葡萄糖：提供可溶性C源，使用化学纯制品，符合国家相关产品标准。

    ③琼脂：理化性状稳定，在培养基中仅提供凝固剂的作用，应从医药用品商店购买，产品符合国家药典规定的相关产品标准。

    ④磷酸二氢钾与硫酸镁：补充菌丝生长需要的大量元素，还有调节和缓冲pH值的作用，使用化学纯制品．符合国家相关产品标准。

    ⑤水：提供菌丝赖以健康生长发育的水分，通常使用洁净的自来水，应符合GB 5749标准要求。

    ⑥盐酸与氢氧化钠：选用化学纯制品，符合国家相关产品标准，用于培养基酸碱度调节。

    特殊菌类制种需要时，使用的酵母粉、蛋白胨、麦芽汁、麦芽糖等均应符合国家药典规定的相关产品标准。

(2)母种培养基配方

    PDA培养基配方：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂18～22克、水1000毫升、pH值自然。

    CPDA培养基配方：马铃薯200克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁0．5克、琼脂18～22克、水i000毫升、pH值自然。

    琼脂用量通常是20克，但可以根据具体情况在18～22克之间增减，如气温低时多用、气温高时少用；培养基用于组织分离时多用、用于孢子分离时少用；配制偏酸性培养基用于分离喜偏酸性菌类时多用、配制偏碱性培养基用于分离喜偏碱性菌类时少用。

    食用菌种类繁多，特殊的要求可选用与之相适应的培养基，如蜜环菌适宜用玉米糊培养基等，可酌情选用，但制作培养基的材料必须符合卫生要求，天然材料应确保优质、新鲜、无霉、元病斑、无螨、无虫、洁净，化学材料应选用符合国家相关产品标准化学纯制品，医药用材料应选用符合国家药典规定的相关产品标准。

2．母种培养基制作流程

    母种培养基制作方法大同小异，以下仅以PDA培养基为例阐明制作流程。

(1)培养液配制

    ①马铃薯浸提：马铃薯洗净，去皮，除绿，挖芽，按配方称取；切成3毫米厚小片或l立方厘米小块；适量水中加热，煮沸20～30分钟，直至马铃薯发白、变软，用筷子捅时可捅出洞但不碎裂为度，不可煮太烂，否则培养液浑浊不清澈；用四层洁净的纱布过滤，过滤前纱布应用清水预湿，以免滚烫的营养液被纱布吸附而损失；取滤液，补水至制作总体积要求，搅拌均匀即得马铃薯浸提液。

    ②琼脂融化：按配方称取琼脂，为了便于加热融化应尽量撕碎，然后投入马铃薯浸提液中加热，长时间存放的琼脂可能附着有尘土。应用水洗净后投入；加热时注意搅拌，一是使琼脂均匀受热，二是避免融化的黏液溢出烧煳，直至琼脂完全熔化。

    ③葡萄糖溶解：按配方称取葡萄糖，用少量水溶解后加入；补水至制作总量，拌匀即得PDA培养液。葡萄糖应最后加入，不宜在锅中沸煮太久，以免焦化。

    其他培养基制作方法与PDA培养基类似．天然有机质如黄豆饼、玉米粉、麦芽、稻草麦秆等，通过浸泡、颗粒大的可破碎，然后热浸提。可溶性有机物，如蔗糖、麦芽浸膏、酵母浸膏、蛋白胨等,同样用少许水溶解，微溶物质可加热搅拌溶解。有的食用菌对酸碱度有特殊要求的，可用盐酸或氢氧化钠调节pH值至所需值。

(2)分装试管

    培养液配制结束后，应马上趁热分装，否则温度降低，造成琼脂凝固，使分装无法进行。分装后应马上灭菌，以免杂菌自繁，造成培养时变质酸败。

    ①容器：母种最常用的容器是玻璃试管，大批量生产时，最好购买相同规格的试管，以保证试管口径、长度、厚薄一致，操作方便。常用18毫米×180毫米或20毫米×2()(]毫米规格的试管，一般根据母种菌丝的生长速度和气生菌丝生长程度选择试管，生长特别快的如草菇，或气生菌丝特别旺盛的宜选用大试管。新试管分装前均应用洗洁剂清洗，除去污渍、油渍和新管中残留的烧碱，然后干燥备用。

    ②分装装置：常用玻璃漏斗套接乳胶管和尖嘴玻璃接液管，乳胶管上配以止流夹。夏天，分装量多时也可用医用灌肠杯代替漏斗。冬季特别寒冷的地区分装速度要快，或将灌肠杯置于低功率(300瓦以下)的小电炉上保温，或漏斗套上铜质保温套，酒精灯灼烧传热棒保温，或在保温环境下分装。

    ③培养基分装：分装时左手抓握4～5根同一规格试管，右手母指和食指控制止流夹，无名指和小指持接液管并将其迅速插入试管，逐一注入培养基。分装量为试管容量的l／5～1／4。分装时应注意避免培养液玷污试管口，否则易招致棉塞污染，为此止流夹弹力要强，接液管应用尖嘴小口为宜，若玷污上培养液应用干净纱布即时擦净。

    ④塞棉塞：棉塞应选用纤维长、干燥、色白、无杂质的梳棉，不可使用脱脂棉。棉塞的作用是过滤菌丝生长过程中出入试管的气体。为保证接种操作方便，塞棉塞要注意三点：一是大小适宜，即塞入管内部分的长度是管口内径的1．5倍，留在管外部分呈球形且直径与管口外径相当，外观上要求两头光滑。二是松紧适度，即要求达到手提棉塞轻摇试管不脱落。三是要求棉塞应顺时针旋转塞人，使用时也要顺时针旋转拔出，两者相互配合来保证接种前后棉塞保持松紧适度，若塞人与拔出方向相反就将解松棉塞。具体方法与步骤如图3—2所示。

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