测定酶解桑葚酒中多糖含量(二)

原标题:紫外可见分光光度法测定酶解桑葚酒中多糖含量

2　结果与讨论

2.1　样品处理

普通浸泡或酿制桑葚酒中往往含有果肉残渣、未溶解果胶等细小颗粒物。胶体溶液的分散相粒子直径范围是 1~100 nm， 粗分散系分散相粒子直径大于 100 nm。胶体溶液分散相粒子对于入射光会产生散射现象 （丁达尔效应） ， 粗分散系分散相粒子则直接阻碍入射光通过。因此用紫外可见分光光度法检测普通浸泡或酿制桑葚酒中某些物质含量时， 比色杯内的胶体和粗分散相粒子都会影响测定的准确性。采用滤膜过滤的办法可以除去粗分散相粒子，但是难以除去胶粒， 测定结果仍然受到影响。酶解桑葚酒制作过程中添加了果胶酶和纤维素酶等， 能够较好地除去上述细小颗粒物， 充分释放桑葚多糖。测定酶解桑葚酒可以直接取样， 无须滤膜过滤， 不影响测定结果的准确性。

2.2　线性方程与检出限

按照 1.2.2 绘制标准工作曲线， 以葡萄糖标准溶液的质量浓度对测得吸光度进行线性回归， 葡萄糖标准工作溶液在 0.92～15.25 μg／mL 范围内呈良好线性关系， 回归方程为 y=0.056 8x–0.035， 相关系数 r=0.999 4。在本实验条件下， 采用 3 倍于空白值的标准偏差 （n=7） 计算得检出限为 0.090 μg／mL。

2.3　精密度试验

分别精确移取酶解桑葚酒样 0.1 mL 于 5 只10 mL 比色管中， 依次加入 1.9 mL 蒸馏水、 0.5 mL苯酚溶液、 1.0 mL 浓硫酸， 摇匀， 于室温下放置 20min， 冷却后以紫外可见分光光度计在 490 nm 处测定吸光度， 测定结果见表 1。由表 1 可知， 该方法测定结果的相对标准偏差为 0.03%， 表明精密度良好。

2.4　稳定性试验

精确移取酶解桑葚酒样 0.1 mL 于 10 mL 比色管中， 依次加入2.9 mL蒸馏水、 0.5 mL苯酚溶液、 1.0mL 浓硫酸， 摇匀， 于室温下放置 20 min， 冷却后于490 nm 处测定吸光度， 每隔 30 s 测一次， 结果表明在 25 min 之内测定结果稳定。

2.5　加标回收试验

分别精确移取酶解桑葚酒样 0.1 mL 于 2 只 10mL 比色管内， 其中一只比色管加入葡萄糖标准溶液 0.1 mL， 然后加水至 2.0 mL ； 另一只直接用蒸馏水补充至 2.0 mL。然后各加入 0.5 mL 苯酚溶液、1.0 mL 浓硫酸， 摇匀， 于室温下放置 20 min， 冷却后以紫外可见分光光度计在 490 nm 处测定吸光度，测定结果见表 2。由表 2 可知， 该方法测定桑葚多糖的回收率在 95.90～101.40% 之间， 平均回收率为98.69%， 方法准确度满足测定要求。

3　结语

用苯酚 – 硫酸紫外可见分光光度法测定酒中多糖含量， 方法可行且简便快速。该方法是针对酶解桑葚果汁果酒中的多糖的测定建立起来的， 也可应用于其它果汁果酒中多糖及花青素的分析测定。

来源《化学计量分析》

作者:杨晓东， 肖珊美， 刁银军， 许玲玲， 杨彩红

（金华职业技术学院， 浙江金华　321007）