空气浮游茵挑战测试法

     既然所有无菌药品的包装都必须有效防止微生物侵入，无菌药品生产企业就要采取适当的验证试验来证明本企业无菌药品用包装在产品有效期内能有效防止微生物入侵。如上所述，既可采用微生物挑战试验法，也可采用物理测试法证明无菌药品包装是微生物的有效屏障。

     尽管物理测试法比微生物挑战法有许多优点，特别是物理测试法有非常高的灵敏度，但是，在实践中制药企业往往还是偏向于选用微生物挑战法。

     这可能主要是受以下因素的影响：

     ①产品的包装方式决定了只能采用微生物挑战试验法，例如，有些包装仅靠弯曲通道来避免微生物污染而不能经受物理检测；

     ②产品包装的设计与物理检测的灵敏度不适应，例如，有些产品包装容器不能承受真空衰减等高压差的作用；

     ③企业的物理检测资源有限，没有专业仪器设备或专业技术对物理检测方法进行充分性验证等。

     鉴于微生物挑战法的广泛使用，本节将在完整性检测试验中使用最普遍的液体浸没法作详细讨论。

     在讨论浸没法之前，先简单了解一下微生物挑战法的另一种方法：空气浮游菌挑战测试法。

     (一)试验原理将装有产品或培养基的产品包装容器置于一专用的带电气雾发生腔室内，腔室内将产生高浓度的空气浮游菌气雾并持续一段时间，挑战期间可改变包装容器内外的压力．以加速微生物从可能的泄漏点处侵入到容器内部。腔室内的气雾需维持在一定的温度和湿度范围内，并且气体要一直保持循环。挑战过程结束后，将腔室内的容器取出。如果容器内灌装的是培养基，则将其至于适当温度下培养检查；如果容器内灌装的是产品，则将产品按无菌检查方法进行无菌检查，但考虑到挑战试验用微生物的单一性，只用一种合适的培养基即可。

     (二)方法验证在验证试验中，需要测定以下关键参数：气雾微生物的浓度及其均一性、腔室温度、湿度和压力、以及培养基的灵敏度(挑战菌的促生长能力)。

     (三)灵敏度本检测法的灵敏度取决于气雾微生物侵入阳性对照品的概率以及对侵入微生物的检测能力。

     (四)试验中的关键控制点

     1．培养基或产品的灵敏度(促微生物生长能力)。

     2．气雾微生物浓度的稳定性。

     3．挑战菌细胞的大小。

     4．气雾粒子所带的电荷量。

     5．挑战时间。

     6．腔室内的气流方式和速率。

     7．腔室内的温度、湿度及压力环境等。

     (五)试验用设备

     1．微生物试验常用的设施和设备。

     2．气密性良好的测试腔室。

     3．菌悬液气雾发生设备。

     4．控制和测定温度、湿度和压力的仪表。

     5．空气浮游菌采样器等。

     (六)测试对象空气浮游菌挑战测试法适用于检测那些无法承受液体浸没法的无菌包装容器以及依赖于曲折导管来维持无菌状态的无菌包装容器。

 
     二、液体浸没法

     (一)试验原理向无菌产品容器中灌装培养基并在正常生产线上压塞和轧盖，根据生产工艺要求确定是否需要灭菌，无菌工艺产品要求灌装无菌培养基而不需最终灭菌，最终灭菌产品则要按生产工艺要求对产品进行灭菌。将容器封口断面浸入在含有高浓度的运动性细菌溶液中。培养这些容器并检查是否有挑战微生物进入。

     (二)方法验证液体浸没试验法可经过验证，主要是测定挑战试验用菌悬液的浓度要足够高，而且所用培养基能充分支持挑战微生物的生长。

     (三)试验的灵敏度本试验的灵敏度取决于挑战菌侵入带有缺陷的阳性对照容器的概率以及检测用培养基的灵敏度。

     (四)试验中的关键控制点

     1．挑战用培养基的配方及其表面张力。

     2．挑战用微生物细胞的大小。

     3．挑战用菌悬液的浓度要足够高(不得低于10⁵CFU／ml)。

     4．样品浸入菌悬液内的时间。

     5．给检测系统施以一定的压差变化。

     6．包装内无菌培养基对挑战微生物的灵敏度。

     (五)试验用设备

     1．供常规微生物试验用的设施和设备。

     2．支持挑战菌生长的培养基。

     3．挑战菌株常用的挑战菌种有，大肠杆菌、产芽胞梭菌、铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌、缺陷型假单胞菌、粘质沙雷菌。

     4．浸入用容器腔室应能进行带有真空和加压系统，还要能控制温度等。

     (六)测试对象浸没试验适用于所有能经受液体浸泡的无菌产品包装的检测。

 
     来源：中国微生物菌种网 www.bnbio.com