无血清培养基的配制方法

     一、无血清培养基的制备

     无血清培养开始使用的时间还不长，完全通用的无血清培养基还处于研究阶段，然而已开始有商品供选择。如 MCDB 系列无血清培养基、Ultroser G等。以 Ultroser G为例，它包括有生长因子、附着因子、微量元素、激素、连结素、维生索等六种物质；此外还含有抑制胰蛋白酶因子，便于用胰蛋白酶传代。Ultroser G 为冻干制品，溶解后可用微孔滤膜过滤除菌，可储存于4℃；它的刺激生长作用相当于胎牛血清的五倍。其他类型无血清培养基也在不断问世。如 MEM Iscove也是一种粉剂无血清培养基，在 MEM的基础上外加有转铁白蛋白、牛血清蛋白和黄豆脂质(soydean lipids )，也是一种较好的无血清培养基。我国无血清培养研究也取得很大进展。毫无疑问，无血清培养基有很大的实用价值，而且是可行的，一定会得到更进一步的发展。

     但由于当前尚缺少广泛使用的定型无血清产品，在所需附加物有限的情况下，也可自行配制。培养用的 ECM有时可以直接加入培养基内，但更经常的是使 ECM 贴附在细胞生长底物表面，生长表面用玻璃或无毒的塑料材料均可。制备过程要在严格无菌条件下进行，具体制备程序如下。

(1)选择适宜的培养基质(ECM)．按上述条件先制备成储存干液。

(2)使用前，储存干液用高纯度的蒸馏水稀释成 0．1mg,／ml 浓度的使用液。

(3)使用液用 0．22μm微孔滤膜过滤除菌。

(4)用吸管吸取使用液，均匀涂于消毒灭菌的细胞培养器皿的细胞生长表面。使用液的用量 509μl／cm²，为保证其表面全部被溶液浸湿，用量可适当增减。

(5)室温下静置 5min(使用胶原做基质时，可适当延长时间至 24min)，然后吸出多余的溶液。

(6)用灭菌蒸馏水(100μl／cm² )洗涤涂有 ECM 的表面，然后尽量将水分吸净控干。

(7)根据不同细胞生长特点，接种适宜浓度的细胞进行培养。

自制无血清培养基举例：

     以上仅是个别实验室的应用配方，但仍有很大的参考意义。然而某一种成分是否必须，并不是绝对的，用量也可以变更。如杂交瘤细胞无血清培养基可去除氨基乙醇；转铁蛋白降至每 5μg／ml，同样也能获得继续分泌抗体的结果。

来源：中国微生物菌种网 www.bnbio.com