黄孢原毛平革菌生长繁殖效应

     实验表明，采用孢子接种物可以很快且正常地启动培养反应。孢子接种后，孢子萌发成菌丝，菌丝相互交织成网，1～2d内形成伸展充满整个容器液面的白色薄膜，成为菌丝垫或菌垫。随着培养时间的延长，菌垫与空气接触的表面会形成白色粉状物——孢子。    

     显微镜观察，菌丝的形态与菌的生理状态相关。在培养初期(10d)，菌丝较托，有的呈现螺旋状，无侧分枝，还可以看到厚垣孢子，菌丝在约10d后形态上将经历显著的变化：从老菌丝的细胞壁中直接发育长出新菌丝分枝，菌丝的生长有限且短小，表现出不同于初期的、以菌丝顶端生长为特征的模式。菌丝的这种生长方式及形态特征，与培养体系中木质素降解活性同时发生。

     在液体振荡培养过程中，孢子接种后，萌发的菌丝在一定的摇速作用下相互缠绕成团，1～3d内形成在容器里随机碰撞的白色小球，称为菌丝团或菌团，孢子接种物形成菌团被认为是一种自然发生的自固定化过程。在浸没培养中，菌团的大小及数量随接种量和转速而变化：接种基大，菌团越大；转速越大，菌团越小，数目越多。在100～200r／min下，菌团直径为3～5mm。后来的实验研究表明，在相同的实验条件下，经过诱变后的菌在振荡培养时，菌团的直径变小，有的还会发生变色反应，其机理有待以后进一步研究。

     黄孢原毛平革菌对振荡所产生的机械剪切力高度敏感，产生这种情况的生理基础是：菌在对木质素及其他异生物质的降解中主要起作用的“工作酶”为胞外酶，菌又是好氧微生物，氧是影响反应及降解效率的重要因子；为提高氧的运输及传质效果所采用的振荡，会严重破坏酶的结构和活性。

     黄孢原毛平革菌的固体培养主要是平板培养，研究实验是以扩大菌的生物量或大量获得孢子为目的的繁殖培养或扩增性培养。在繁殖培养的平板体系中，无论是孢子接种还是菌丝体接种，菌在平板上呈扩散状生民，数天内整个平板表面布满了白色的菌丝。菌丝向培养基内伸人，在离表面约1mm厚的琼脂区内形成坚固的菌丝层。随着培养时间的延长，菌丝向气相伸展，产生大量的孢子，形成的白色粉状物遍布全平板。如果是进行检测培养，则在接种区周缘先形成反应区带，区带的宽度随反应时间而增大；理想条件下会导致整个平板发生反应。

     这种现象在以染料为处理对象的平板中最为明显，染料脱色或变色区带的宽度及反应程度，直观地指示了菌的降解能力。煤炭生物降解转化实验的平板转化实验，即是利用平板培养过程中发生的变色反应来进行的；在煤炭生物降解转化过程中采用固体形式，其意义更多的偏向于定性实验研究。总之，平板体系具有反应迅速、操作简单、测定方便等优点，在以定性为主要目的的初试性研究中具有一定意义和优势。

     根据球红假单胞菌微生物生长量的测定方法，选用干重测定法对黄孢原毛平革菌进行生长量的测定。其方法为：用60℃干燥箱烘干至恒重后，用称重的滤纸来过滤培养液。由于黄孢原毛平革菌菌丝附着在锥形瓶壁上，用蒸馏水洗涤干净并过滤；用蒸馏水洗涤过滤物除去培养基成分后，转移到培养皿中，另取一干净滤纸密封培养皿，置60℃干燥箱烘干6h后，称重。

     从培养过程中可以发现，24h之前黄孢原毛平革菌培养液中菌丝体很少，30h之后菌丝体快速生长，42h之后菌体生长速度开始趋于缓和，这可能是由于培养液中营养物质消耗殆尽，并且菌体进入了生长期后期造成的。另外，还可以观察到在液体培养基中菌体的生长速度比在固体培养基中的快，且随着培养时间的延长，菌体聚集成块，最后浮于培养液的表面。分析可知，黄孢原毛平革菌的生长期在30h～42h之间。黄孢原毛平革菌培育生长曲线如图3—1所示。

来源：中国微生物菌种网 www.bnbio.com