细胞脱核技术应用

(实验用品】

材料：贴壁生长的单层细胞

器材：培养皿、Polystyrene塑料板、离心机、离心管、紫外灯

试剂：松胞菌素质B、乙醇、蒸馏水

【试剂配制】

CB 10μg/ml营养液将CB溶于二甲基亚砜中，即1ml CB加1ml DMSO作为母液，4℃可存放三年。取1ml干液加99ml营养液，使其最终浓度为10μg/ml。

【实验步骤】

(1)接种：取数个塑料圆板置于培养皿中，接种细胞悬液，置CO₂温箱培养。

(2)离心脱核：待细胞生长到即将汇合连接成片之前做脱核处理。在无菌条件下先把垫圈置人离心管中，再投入细胞圆板，令细胞面向下，最后加入CB 10μg/ml营养液。加入的量以淹没圆板为宜。

(3)离心：12 000r/min，离心15～20min，并要保持37℃的温度，在这样条件下，能有99％细胞的核被脱掉。离心速度过高，持续时间过长，可导致细胞丢失。

(4)分离：从离心中取出附有细胞的圆板，用不含CB营养液漂洗2～3次，每次1～2min，置人原培养液中继续培养，使细胞恢复由离心所引起的形态改变，15~30min后，即可恢复正常形态。

【结果分析】

分离后留在圆板上的细胞皆为无核的胞质体，可用于做融合等各种实验。亦可取出投入固定液中固定，制成染色标本。沉于离心管底者为脱出的胞核，核周围仍包有薄层胞质。进一步处理方法是：吸除上清液，用正常营养液漂洗1～2次以除去CB，然后可用于做融合等各种实验，或用吸管吸出，涂片、固定、染色后制成标本。

【注意事项】

(1)为防止细胞丢失离心速度不要太高，离心时间不宜太长。

(2)垫圈不能过高，过高需加大CB量，造成浪费。

(3)细胞生长到连接成片后，离心时细胞易成片脱落。所以要在即将汇合连接成片之前做脱核处理。

来源：中国微生物菌种网 www.bnbio.com