XY染色质检测和荧光原位杂交技术

  1.X染色体质检测技术
 

  用人体的体细胞，如口腔上皮细胞或女性个体，的阴道上皮细胞，经过固定、滴片、染色等处理，在显微镜下可发现部分细胞核膜的内缘有一块染色较深、大小为1μm左右的呈半月形的小块，即X小体。一个分裂间期细胞核中仅有一条X染色体呈松散状态，参加细胞生理活动，另一条X染色体则仍保持异固缩的状态，所以染色较深而成为X小体。正常男性个体只有一条X染色体，不可能出现X小体；正常女性只能出现一个X小体。X染色质检测技术除可用于性别鉴定外最多的是应用于临床上X染色体数目异常染色体病的辅助诊断。如：临床上常见的45，X(特纳综合征)的个体只有一条X染色体，所以X染色质数目为0。一个细胞中所含的X染色质的数目等于X染色体数目减1。
 

  由于人体细胞中的两条X染色体中的一条失去活性(称为Lyon化现象)，这样就保证了只有一条X染色体保持转录活性，使男女X连锁基因产物的量保持在相同水平上，这种效应称为X染色体的剂量补偿。但是，失活的X染色体上基因并非都失去了活性，有一部分基因仍保持一定活性，因此X染色体数目异常的个体在表型上有别于正常个体，出现多种异常的临床症状和体征，且X染色体越多，表型异常越严重。
 

  2.Y染色质俭测技术
 

  1970年caspersson等发现Y染色体长臂经荧光染料染色后具有特异的荧光。随后，不同的研究者用同类的荧光染料对男性的各种间期细胞核，以及精子的头部进行染色，均可观察到一个类似于Y染色体长臂的直径约0 3um的圆形或椭圆形的荧光亮点，而在女性中则没有。从而确认Y染色质是Y染色体长臂上的一部分，即Y小体。最初，Y小体的检测主要用于绒毛、羊水中胎儿的性别鉴定。现主要应用于Y染色体数目异常和Yql2区结构变异的辅助诊断。
 

  3.荧光原位杂交技术
 

  荧光原位杂交(FISH)技术是20世纪80年代发展起来的一项分子细胞遗传学技术。其原理是将荧光素直接标记的核酸探针(或生物素、等标记的核酸探针)与标本中的靶核酸序列按照碱基互补配对原则进行杂交，经洗涤后直接(或通过免疫荧光信号扩增)在荧光显微镜下观察，从而对靶目标中的待测核酸进行定性、定位或定量的研究。
 

  由于传统的细胞遗传学分析无法识别微小缺失、插入、倒位、易位及标记染色体等。FISH可用于外周血细胞、脐带血细胞、未经培养的羊水间期细胞以及胚胎和肿瘤细胞等进行相对于传统细胞遗传学更加快速的检查；由于FISH所需的标本量少、操作相对简便、快速、结果准确率高，以及后来发展起来的多色荧光原位杂交技术(multiplex．FISH)能够对全部24条染色体进行多色核型分析，更加扩展了FISH技术的应用范围。
 

  当然，由于受特异性探针制约，对于较复杂的染色体畸变FISH不易一次做出诊断；同时还存在一些不可避免的假阳性与假阴性结果的产生，以及商业化探针价格相对昂贵。在实际临床应用中FISH技术不可能完全代替常规染色体核型分析，就染色体病诊断而言，染色体检查及染色体显带技术仍然是其他方法不可替代的最为基本的检测手段。若把FISH技术与常规染色体核型分析技术相结合，将为染色体疾病的诊断开辟更广阔的途径。

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