细胞冻存和复苏

一、细胞冻存

细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少人力、经费，减少污染，减少细胞生物学特性变化。细胞冻存原则是慢冻快融。当细胞冷到0℃以下，会造成细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰品形成大冰品，即冰晶的重结晶。

在细胞冻存时加入低温保护剂，能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO，它是种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。常用配方为2×冻存液(40％血清培养基+40％ 血清+20％DMSO)。

目前已经有商业化无DMSO无血清细胞冻存液，它是一种化学成分确定、不含动物源成分，也不含DMSO的冻存液。可直接使用，无需梯度降温。

二、细胞复苏

细胞复苏是将冻存在液氮中的细胞解冻后重新培养。细胞复苏过程升温要快，防止在解冻过程中水分进入细胞，形成冰晶，影响细胞存活。具体步骤：从液氮中取出冷冻管，迅速投入37℃水浴中，使其融化(1分钟左右)。5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上，800rpm低速离心10分钟，去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。 

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