急性经口毒性试验

背景知识

　　急性毒性是指机体（人或试验动物）一次（或24小时内多次）接触外来化合物之后所引起的中毒效应，甚至死亡。在进行毒性试验时，常以急性经口毒性试验、急性吸入毒性试验和急性经皮毒性试验为主。

实训过程说明

　　本次实训分为采样前的准备、布点、采样、样品的保存，将样品带回实验室进行预处理，试验动物的选择、染毒以及试验动物反应观察，将监测结果进行合理应用。

实训目的

　　1.掌握毒性试验法判断危险品毒性的原理和方法；

　　2.掌握采样、预处理、试验动物的选择、灌胃以及试验动物反应观察技能；

　　3.熟悉数据的记录以及处理，掌握结果的应用技能。

方法选择

　　急性毒性初筛包括急性经口毒性试验、急性吸入毒性试验和急性经皮毒性试验，可根据危险废物的性质不同合理选择试验方法。本项目选择急性经口毒性试验和急性经皮毒性试验进行实训。

一、急性经口毒性试验①

　　原理

　　将固体废物制成液态试样，对经选择后的试验动物进行灌胃，根据引起灌胃试验动物在14天死亡一半的剂量判断该废物是否为危险废物。

仪器设备

　　灌胃针、电子天平、动物体重秤、外科剪刀、镊子以及常规玻璃仪器等。

试剂

　　苦味酸（C6H3N3O7）酒精饱和液②：取95%乙醇10mL，在不断搅拌下加入苦味酸，直到有不溶苦味酸晶体存在。

　　步骤一：试验动物的选择

　　选用大鼠或小鼠，小鼠体重18耀2g，大鼠体重180耀220g。成年健康的试验动物进入实验室后，应适应环境3~5d。

　　试验前试验动物应禁食（一般16h左右），不限制饮水。若采用代谢率高的其他动物，禁食时间可以适当缩短。正式试验时，称量动物体重，随机分组。用苦味酸（C6H3N3O7）酒精饱和液在动物身上做标记。

　　步骤二：试样制备

　　将危险化学品放入已知质量的容器内称量，加溶剂溶解或稀释，倾入刻度容器内，摇匀，再加溶剂至刻度，算出浓度①（mg/mL）备用。

　　将受试样品溶解或悬浮于适宜的赋形剂中，应首选水或食用植物油（如玉米油）作溶剂，也可考虑使用其他赋形剂（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）配成混悬液；不能配制成混悬液时，可配制成其他形式（如糊状物等），但不能采用具有明显毒性的有机化学溶剂。如采用有毒性的溶剂应单设溶剂对照组观察。

　　步骤三：染毒

　　将试验动物随机至少分为四个剂量组②，每组10只动物，雌雄各半。对各组动物用经口灌胃法一次染毒③。各剂量组的灌胃体积应相同，小鼠常用剂量为20mL/kg体重，大鼠常用剂量为10mL/kg体重。染毒后继续禁食3耀4h。若采用分批多次染毒，根据染毒间隔长短，必要时可给动物一定量的食物和水。

　　灌胃时用左手捉住小白鼠，使之尽量成垂直体位，右手持已吸取浸出液的注射器，将注射器缓慢插入小白鼠口内，推动注射器使浸出液徐徐进入小白鼠胃内。

　　注：如果受试样品毒性很低，也可采用最大限量法，即用20只动物（雌雄各半），采用500mg/kg体重剂量，如未引起动物死亡，应停止急性经口毒性试验。

　　步骤四：中毒表现观察

　　观察试验动物的中毒表现，啮齿类动物中毒表现观察项目表见表5-9。

　　

　　  

　　步骤五：数据记录与处理

　　对试验动物染毒后观察14d，记录死亡数，查表求得LD50值，并记录死亡时间及中毒症状。霍恩氏（Horn）法LD50值计算用表见GB15193.3-2003附录A。数据记录表见表5-10。

　　

　　LD50及95%可信区间：

　　雄性动物：

　　雌性动物：

　　步骤六：数据评价

　　通过急性经口毒性试验和LD50的测定可评价受试物的毒性，同时评价动物接触受试物与动物异常表现（包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死效应及其他毒性作用）的发生率和严重程度之间的关系。毒性分级见表5-1。

　　注意事项

　　在将针头插入白鼠胃部后用注射器向外抽气，如无气体抽出说明到达胃部，即可进行灌胃。如注射器抽出大量气体，说明已进入肺部或器官，应拔出重插。如果注入后迅速死亡，则可能是传入胸腔或肺内。

 

　　【关键词】毒性 苦味酸 北京标准物质网



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