金黄色葡萄球菌检验流程分新

　　【来源/作者】北纳创联 

　　(1)检验流程

　　依据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》(GB478．9．10一2010)．定性和定量检测金黄色葡萄球菌的流程见图3—14、图3—15和图3一16。

　　(2)腺理

　　GB 4789．10—2010中选用的增菌肉汤(10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤和7．5％氯化钠肉汤)，都含有较高浓度的氯化钠，这是利用了金黄色葡萄球菌耐盐的特性，没有其他的筛选因子。

　　Baird—Parker琼脂具有选择性和鉴别性，它含有的丙酮酸钠，能刺激金黄色葡萄球菌的生长而不会破坏选择性。亚碲酸钾添加剂对除了金黄色葡萄球菌以外的能分解卵黄的菌株具有毒性，许使葡萄球菌的菌落变黑。卵黄添加剂是营养，也能指示菌株是否具有卵磷脂酶活性(卵黄反应，产生晕圈)。甘氨酸和氯化锂能抑制除了金黄色葡萄球菌以外的微生物的活性。

　　血平板没有选择性，似是能显示出菌株是否具有溶血能力。是金葡较好的分纯培养基。

　　我国检测的金黄色葡萄球菌，在欧美地区一般被称为凝固酶阳性的葡萄球菌，但所用的标准菌株还是金黄色葡萄球菌S．aureus。GB 4789．10一2010中对目的菌的最终确认，就是利用凝固酶反应。

　　(3)需要注意的问题

　　1)一般在定性检验巾，常用的是7．5％氯化钠肉汤，选择性已经够了。在标准中提到“污染严重时在10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长”(见GB 4789．10中5．2．1)，即如果预计细菌污染严重，无论污染的是什么细菌，应使用抑制性更强的增菌液，可以抑制大量非目标菌的生长．故“适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球荫的计数”的第三法(MPN法)用的就是10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤。

　　2)第二法中，三块Baird Parker平板分别接种0．3mL、0.3mL和0．4mL的稀释液，这个量比一般表面接种的0．1mL大得多，操作的时候注意两点：第一·涂布的动作要缓慢均匀，不要将接种液推到平板的边缘或外面．如果堆积在平板边缘·可能造成边缘有较多的菌落聚集听尤法汁数；第二．涂布完成后，不要立即将平板倒置，待菌液被吸收，琼脂表面没有明显的液体时，才能将平板倒置。

　　3)第三法中，要求从有细菌生长的10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤管中取样接种Baird—Parker平板。那么必须仔细观察各管的生长情况，一般变浑浊即有生长；如果不好判断，可以震荡试管，观察是否有沉淀等，

　　4)金黄色葡萄球荫S．aureus在Baird—Parker平板上的菌落较小，直径为2min～3mm，3mm已经址较火的。如果发现很大的菌落，直径到4mm以上，质地较稀，即使是黑色也不川考虐

　　5)金黄色葡萄球汹S．aureus在血平板上并不经常是金黄色的-时常为灰白色。培养24 h后，溶血小是特别明显，不一定能使血平板变得完全透明．一般要从平板的背面仔细观察。杂菌较多时，由于没有抑制性，血平板上会生长较多菌落，所以金黄色葡萄球菌S．aureus不能得到充分的生长空间，可能菌落较小。再有一个问题就是溶血区域的重叠。如聚有几个菌落在溶血区域中，要仔细区分到底是哪个菌落形成的溶血，不能确认就进行再次使用血平板进行分离纯化。

　　6)加工食品中的金黄色葡萄球菌可能受到冷、热、干、酸、辐射等环境的损害，其在分离平板上的菌落与标准中描述的可能有差异。在挑选特征性菌落的时候不能拘泥于标准中的描述，即使不具备全部特征也要进行确认，防止漏检。

　　7)做凝固酶试验要特别注意，由于兔血浆的质量参差不齐，或者菌株的凝固能力的差异，凝固的效果町能不像标准或说明书中描述的那样明显。如果有可能，选择多种试剂进行比较，选择效果最好的。标准中要求同时用凝固酶试验阳性和阴性的葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。这是非常必要的。检验人员不能自恃经验丰富就忽略对照的作用。每批试剂、每次的分离培养过程、每次的样品都有不同．不可能完全一样，有阴性和阳性的对照菌株作为参照．可以保证结果判定不主观臆断。

　　8)虽然在GB 4789．10 20lO中没有提出．但是全程伴有阳性和阴性对照其实足保证检验结果的有效措施，其他的致病菌的检验也应如此。

　　9)葡萄球菌是否产凝固酶和产肠毒素无直接对应关系。当食品中检出金黄色葡萄球菌时，表明食品在生产过程中环境卫生条件较差或操作人员个人卫生不合格．但并不一定说明该食品会导致食品中毒。当食品中未分离出金黄色葡萄球菌时，也不能证明不存在葡萄球菌肠毒素。

　　10)检验人员要在长期的检验实践经验积累中。提高对各种现象的判断力。现场制作的食品中，出现金黄色葡萄球菌的可能性较高，常温保存的包装食品中含量极少。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，所以一般被认为不适合微生物生长的盐渍食品、腌制食品也可能受污染。在含水分、蛋白质、淀粉丰富的食品中金黄色葡萄球菌容易繁殖并产生毒素。金黄色葡萄球菌在氧分压低时较易产生毒素。因此在通风不良的高温环境中储存食品具有较高风险。由于葡萄球菌不能与大多数常见微生物进行有效竞争·即使在有利于金黄色葡萄球菌的温度中，食品中的腐生菌群能抑制其生长，因此金黄色葡萄球菌的污染通常与加热破坏了天然微生物区系的食品有关。受二次污染的熟食．更易于促进金黄色葡萄球菌大量生长并产毒。

　　11)对分离平板上的菌落的判断也需要多看多做。尽信书不如无书。必须将标准中的规定转化成感官的认识才能真正掌握检验方法，提高试验的效率。


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