副溶血性弧菌检验流程分析

　　【来源/作者】北纳创联 

　　(1)检验流程

　　依据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》(GB 4789．7 2013)，副溶血性弧菌的检验程序见图3一l 7。包括定性检验和定量检测。

　　(2)原理

　　副溶血性弧菌对营养要求不高．为嗜盐菌，在无盐的培养基上不能生长，必须在含盐O．5％～8％的环境中方可生长，尤以含盐量在3％～4％的情况下最佳，在含盐浓度过高(10％以上)的培养基上也无法生长。它还耐碱，所以用3％氯化钠碱性蛋白胨水作为它的增菌培养基，具有一定的选择性。

　　TCBS平板的全称是ThlosuIfate citrate Bik salts sucrose Agar，即硫代硫酸盐(T)一柠檬酸盐(c)一胆盐(B)一蔗糖(S)琼脂。它是广泛使用的用于选择性分离致病性弧菌的基本培养基。培养基中含有的牛胆汁．能抑制革兰氏阳性细菌；硫代硫酸钠和柠檬酸铁能检测是否有硫化氢生成；碱性的pH能抑制绝大多数细菌；溴麝香草酚蓝和麝香草酚蓝是pH指示剂。副溶血性弧菌不发酵蔗糖，不会使培养基pH降低，因而在颜色上与发酵蔗糖的霍乱弧菌不一样。

　　鉴定副溶血性弧菌的培养基都要含有适量的钠．以利于它的生长。初步生化鉴定应使用3．5％氯化钠TSI，而嗜盐性试验更是通过不同钠的浓度来有效的区分出目标菌。

　　如果要对分离到的副溶血性弧菌菌株进行致病性及其原因的分析，可以选做血清学试验和神奈川试验。

　　(3)应注意的问题

　　1)副溶血性弧菌在4℃下不稳定，在室温下保存效果良好。由此可知它不适于低温生存，在寒冷情况下易死亡，所以不要低温存放待检样品，以免影响检验结果。同理．所分离得到的阳性菌株最好常温存放．冰箱存放易死亡或进入非培养状态。

　　2)夏季是副溶血性弧菌感染的高发期，针对水产食品取样时要特别注意使用不透水、不外溢的样品包装，存放的时候不同样品要有效隔离，防止不同样品上流出的液体混杂，造成样品间的交叉污染。

　　3)标准中提到“鱼类和头足类动物取表面组织……”(见GB 4789.7—2013中5．1．2)，这要特别注意。如果在含有副溶血性弧菌的水体中生活，表面污染是不可避免的．不论其用于生食或熟食，都可能通过案板、刀或厨师的手在厨房中造成交叉污染，这是不容小觑的食物中毒的源头。所以我们要特别注意水产品的表面污染的问题。

　　4)该菌需氧性明显，在碱性蛋白胨水中经36℃增菌8h～18h增菌呈均匀混浊生长且培养基表面易彤成菌膜。所以在分离时．要求“用接种环在距离液面以下1cm内沾取一环增菌液”，在这个范围内，应该是目标菌最多的区域。

　　5)除丁霍利斯弧菌在TCBS上不能生长，TCBS对副溶血性弧菌的选择性和对其他弧菌是一样的．但霍乱弧菌是黄色菌落，副溶血性弧菌是绿色或蓝绿色菌落。创伤弧菌和拟态弧菌都不发酵蔗糖，菌落颜色和副溶血性弧菌差不多．很难区分，只能通过后续的确认试验区分。一般样品中的含有多种弧菌比较常见，分离的时候一定要在平板上多级稀释划线，保证菌落分离，不要一条线划到底．培养后出现菌落未分开结果无法判定的情况。

　　6)现在常用的弧菌显色培养基利用的是致病基因，靶向明确，能直接通过颜色和形态区分出副溶血性弧菌，极大地提高了分离筛选的效率。


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