薄层色谱扫描仪波长示值误差校准方法(一)

　　摘要 目前我国没有薄层色谱扫描仪国家检定规程， 一些地方或部门标准中的波长示值误差项目计量方法可操作性不强。通过对比现有标准， 提出了一种薄层色谱扫描仪波长示值误差计量方法。该方法利用计量单位使用的钬玻璃波长滤光片作为计量标准器， 操作步骤与样品测试类似， 波长示值误差的扩展不确定度为 0.6 nm (k=2)， 满足校准要求。该法降低了计量操作难度， 可作为计量人员的参考依据。

　　Calibration Method for Wavelength Indication Error of Thin Layer Chromatographic Scanner

　　Abstract There is no regulation about thin layer chromatography scanner national verification in our country.Operability was not strong for some local or departmental standards. By comparing the existing standards， a new method for measuring the wavelength indication error of thin layer chromatography scanner was put forward. Holmium glass wavelength filter was used as the measurement standard in the method. The operation steps were similar to the sample test.Expanded uncertainty of wave wavelength indication error was 0.6 nm (k=2). It could meet the calibration requirement. The method reduces the difficulty of measurement and it can be used as a reference basis for the measurement.

　　Keywords TLC scanner; metering; indication error of wavelength; holmium glass wavelength filter

　　薄层色谱扫描仪是薄层色谱分析法使用的主要仪器， 广泛应用于中草药、 中成药的成分分析和合成药物分析方面。随着医药工业、 临床医学、 环境科学和食品化工等行业的快速发展， 薄层色谱扫描仪的应用越来越广［1］。虽然目前各国生产的薄层色谱仪规格不同， 性能各异， 但其测定的基本原理相同， 即用一束长宽可以调节的一定波长、 一定强度的光照射到薄层斑点上进行整个斑点的扫描， 用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的变化达到定量的目的。薄层色谱扫描仪的校准， 现阶段没有国家检定规程或校准规范， 只有地方检定规程和行业检定规程， 如河北省出台的地方检定规程JJG(冀)059–2004 《薄层色谱扫描仪检定规程》［2］等。

　　已有不少计量工作者对该类仪器的计量进行研究，探索出一些行之有效的校准方法［3］， 除此之外生产厂家也针对自己的仪器提供了内部校正方法。针对薄层色谱扫描仪波长示值误差的校准方法， 现有的标准及计量工作者发表的论文所采用的方法大致相同： 将光源选择至汞灯位置， 移开光源室盖， 将低压汞灯放在单色器入微狭缝前面， 将其固定； 将空白标准薄层板放在样品室内， 对准光束； 调节波长至 436 nm 处， 将负高压开关改为手动控制， 调节负高压使吸光度值处在 3.0 左右； 选择较小狭缝、 荧光线性测定方式， 进行光谱扫描； 扫描200～700 nm 的汞灯谱线， 记录峰值波长， 与标准波长的差值即为示值误差［3–4］。仪器生产厂家则是利用仪器自身氘灯进行内部校正， 一般都有专用的波长校正软件来进行该项操作。

　　实际操作中以上两种方法都有一定局限性。现有的标准中提供的用低压汞灯来进行波长校准的方法， 需要对仪器内部结构比较熟悉， 有较长工作经验的校准人员才能完成操作； 且因需打开仪器光源室在仪器内部进行操作， 部分用户不易接受。在进行国外仪器波长校准时， 需应用校正软件， 而校正软件一般不是仪器标准配置， 另外购置需要几万元， 用户一般不会配备该软件。国内厂家虽然免费提供波长校正软件， 但其低端设备只能校正一个波长点， 不能对全波长范围进行有效校正。高端设备市场占有率不高， 一般校准时很难接触到。

　　针对以上问题， 笔者结合用户实际操作， 提出一种新的校准方法： 以钬玻璃波长标准滤光片作为校准标准设备， 不需要专用的校正软件， 校准人员只需将钬玻璃波长标准滤光片当作日常样品进行检测， 在检测的过程中即可对波长进行校准。

　　1波长示值误差校准步骤

　　(1) 标准滤光片扫描坐标的确定。开机预热， 放置钬玻璃波长标准滤光片于薄层扫描仪主机箱薄层板装载台上， 然后在薄层扫描仪主机上手动调节光狭缝， 使光斑能扫描到整个钬玻璃波长标准滤光片，记录仪器中显示的坐标 X 轴和 Y 轴数据， 以此作为钬玻璃波长标准滤光片扫描起止位置。

　　(2) 标准滤光片扫描点的确定。打开操作软件，设置仪器扫描参数： 将步骤 (1) 中确定的坐标 X 轴和 Y 轴数据输入； 选择钬玻璃波长标准滤光片的一个峰值波长 ( 从该标准器的检定或校准证书上可以获得 ) 为扫描波长； 选择较大的狭缝尺寸、 适中的扫描速度和反射测量模式； 其它参数按日常样品进行设置。仪器参数设置好以后， 对钬玻璃波长标准滤光片进行定波长扫描。由于钬玻璃波长标准滤光片的边缘效应， 扫描时滤光片的边缘会形成尖锐的峰形。故只需选择两个尖峰之间的峰值点作为钬玻璃标准滤光片扫描点即可。

　　(3) 标准滤光片的全波段光谱分析。锁定需做光谱分析的钬玻璃标准滤光片扫描点后， 对其进行全波段扫描， 扫描完成后对谱图进行解析， 即可获得钬玻璃波长标准滤光片的光谱图。其各个峰值波长与标准值之差的最大值即为波长示值误差。


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