球红假单胞菌原生质体的紫外诱变

　　【来源/作者】北纳创联 

　　
　　原标题：球红假单胞菌原生质体的紫外诱变及其煤炭降解转化实验研究

　　
　　1. 球红假单胞菌原生质体的紫外诱变选育

　
　　取酶解40min的原生质体，用渗稳剂稀释至10⁶个mL，取5mL菌液放在直径为9cm的无菌培养皿中，将培养皿置旋转圆盘(33r／min)上,并使其距离紫外灯30cm处，处理时间梯度为：20s，40s，60s，90s，l20s，l50s，180s，200s。紫外照射后，暗修复2h，以免引起光修复。将处理过的原生质体适当稀释，涂布平板，黑暗避光培养．计算致死率。

　　2. 煤炭生物降解转化率的测试方法

　　煤炭生物降解转化率的测试方法按煤炭微生物降解转化率的测定方法中方法二执行。

　　3. 实验结果与分析

　　(1) 紫外辐射对球红假单胞菌原生质体致死效应的影响

　　球红假单胞菌的原生质体经过紫外辐射处理，致死率明显。辐射处理时间为20s时，原生质体的致死率就达86．3％；辐射处理时间为120s时。原生质体的致死率达到98．1％；辐射处理时间为150s时，原生质体死亡率达到100％。球红假单胞菌的原生质体致死率和辐射时间关系如图5—3所示。

　　

　　从图5—3可知，紫外辐射球红假单胞菌原生质体在前20s时，其原生质体的致死率的增长梯度迅速，其后随着辐射时间的延长，原生质体的致死率增加梯度缓慢，处理时间为150s时，球红假单胞菌的原生质体的死亡率达到100％。这表明球红假单胞菌的原生质体对紫外辐射十分敏感，致死效应非常明显。

　　紫外线辐射对菌体的诱变机理如黄孢原毛平革菌的紫外诱变及其煤炭降解转化实验研究所述，本节实验特别之处在于球红假单胞菌原生质体由于失去细胞壁的庇护后，极易受到紫外辐射的影响，更易引起微生物的突变，这也是细菌原生质体更适合进行诱变育种的原因。

　　在以后的试验：微波辐射诱变球红假单胞菌原生质体、紫外辐射诱变黄孢原毛乎革菌原生质体和微波辐射诱变黄孢原毛平革菌原生质体的实验中，都存在以上情况，在以后的实验中不再一一叙述。

　　(2) 紫外辐射诱变球红假单胞菌(原生质体)的煤炭生物降解转化结果

　　紫外诱变球红假单胞菌(原生质体)的煤炭生物降解转化结果如图5—4所示。

　　

　　紫外辐射诱变球红假单胞菌(原生质体)的煤炭生物降解转化结果是：原生质体辐射处理时间为60s时，球红假单胞菌对义马褐煤的降解转化率达到最大，为46．32％；原生质体辐射处理时间为90s时，球红假单胞菌对硝酸处理褐煤的降解转化率达到最大为82．65％；原生质体辐射处理时间为90s时，球红假单胞菌对淮南潘二煤矿次烟煤的降解转化率达到最大，为18％；原生质体辐射处理时间为40s时，球红假单胞菌对山西白煤的降解转化率达到最大，为41．62％。

　　造成原生质体辐射处理时间在不同点时对不同种煤的降解转化达到最大的原因是：球红假单胞菌的原生质体对紫外辐射十分敏感，致死效应非常明显，从20s时的86．3％到120s时的98．1％和150s时的100％。

　　原生质体的致死率增加梯度缓慢，所以在此诱变辐射时间内球红假单胞菌存在不同的正突变率，不同正突变率下的细菌对不同阶煤炭存在不同的降解转化率。

　　来源：北京标准物质网 www.biaowu.com