酵母菌的形态观察及死、活细胞的鉴别

一.基本原理

酵母菌是多形的，不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大几倍甚至十几倍。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，但裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色制成水浸片，和水-碘水浸片来观察活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。用美蓝对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此。用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加以注意。

二.器材

(1)酿酒酵母或卡尔酵母培养约2d的麦芽汁(或豆芽汁)斜面培养物；

(2)0.05％和0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰染色所用的碘液；

(3)显微镜，载玻片，盖玻片等。

三.操作步骤

1．美蓝浸片的观察

(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48h的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。液滴 不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。 

(2)用镊子取盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下 去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。 

(3)将制好的水浸片放置约3min后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，并根据是否染上颜色来区别死、活细胞。

(4)染色3min后，再观察死细胞数是否增加。

(5)用0.05％吕氏碱性美蓝染液重复上述的操作。 

2．水-碘浸片的观察 

在载玻片中央滴一滴革兰染色用的碘液，然后再在其上加小滴水，取酿酒酵母少许，放在水一碘液滴中，使菌体与溶液混匀，盖上盖玻片后镜检。

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