细菌内毒素标准品

    医药工业微生物实验室使用的细菌内毒素标准品可包括国家标准品(RSE)工作标准品(CSE)和内毒素挑战品。

    一、细菌内毒素国家标准品和工作标准品

    
    细菌内毒索标准品分国际标准品、国家标准品、工作标准品三档，国外药典所称的 “reference standard "(参考标准品)属于国外的工作标准品。

  
    细菌内毒素国际标准品是由国际卫生组织(WHO)标定分发的，效价为10.000EU/瓶(或支)。

我国的细菌内毒素国家标准品是由国家主管部门——中国药品生物制品检定所组织、会同省级以上资深药品检验所协作用国际标准品标定过的标准品，效价一般在5000EU／瓶(支)以上。因其价格、效价相对较高而且稀释步骤繁琐，主要用于标定细菌内毒素工作标准品及鲎试剂的灵敏度测定和确认。

    细菌内毒素国家标准品和国外参考标准品的效价较高，溶解时需要间断振荡30分钟。溶解后的标准品可在冰箱内保存，但不得超过14天。使用前应充分振荡3分钟以上。配制各稀释度时，每个稀释度至少要振荡30秒钟。稀释后的内毒素溶液不宜长时间保存，因其吸附性会导致其活性下降，影响对照试验结果。标准品溶解后的保存条件应予验证。

    细菌内毒素工作标准品主要用于鲎试剂的灵敏度复核、样品检验的方法验证(抑制和增强试验)以及常规检验的阳性对照。由中国药品生物制品检定所发放的细菌内毒素工作标准品是统一经国家标准品标定过的，效价控制在 50EU/支或 100EU/支。

    对新购的细菌内毒素工作标准品，可先用国家标准品复核其效价。复核时依照细菌内毒素检查步骤，用规定灵敏度的鲎试剂对细菌内毒素国家标准品(RSE)和工作标准品(CSE)的各个稀释度进行凝胶对照试验，每个稀释度用四支相同的小试管，分别计算二者的反应终点浓度对数的算术平均值，RSE的单位为EU／ml，CSE的单位为ng／ml。将二者比较后就得到CSE的效价EU／ng。所有的实验都应被详细记录以备查询。

     二、内毒素挑战品

    细菌内毒索挑战品是用于干热法去热原工艺验证的对照品。一个合格的干热去热原工艺应使细菌内毒素至少下降3个对数单位。用分别测定内毒素挑战品在去热原工艺处理前和处理后的内毒素含量的方法，来评价相应去热原工艺条件的可靠性。

    (一)标准内毒素的稀释认真阅读标准细菌内毒素瓶标签，弄清其效价。一般情况下，标签上标有批号、效期、效价(如2．5mg/vial，6EU／Ng)以及加入规定量的鲎试验用水(通常为5．0ml)后的内毒素浓度(如 500μg/ml )，同时还规定了细菌内毒素复溶后的贮存条件(通常为2—8℃下保存4周)。

打开瓶塞(或安瓿)，用无热原移液器移取规定量的鲎试验用水于标准内毒素瓶内，塞上瓶塞，于涡旋振荡器上充分间断性振荡30分钟，以使内毒素充分溶解。根据复溶后的内毒素初始浓度用鲎试验用水作系列稀释，直至浓度为(1．5～3．0)×10⁴EU／ml。

    (二)内毒素挑战品的分装在层流台内，向每只洁净的容器内加入上述稀释浓度为(1．5～3．0)×10⁴EU／ml 的细菌内毒素溶液0．1ml(细菌内毒素含量为1500—3000EU／容器)，将加有上述内毒素的容器敞口于层流台内风干12小时以上，待容器内水分全部风干后，用已去热原的铝箔封口。

(三)挑战试验容器的复核任取上述风干后的挑战试验用容器两只，分别加入适量的鲎试验用水，并于涡旋振荡器上问断振荡30分钟，以使内毒素充分复溶，根据细菌内毒素检查法检查，并用半定量法分别测定其内毒素含量。

    如果上述两挑战试验容器的测定结果均在1500一3000EU／容器之间，则在所有的挑战瓶上贴上标签，注明名称、标准内毒素含量及分装日期等，同时做好分装记录。如果上述两挑战试验容器至少有一只不在上述范围内(1500—3000EU／容器)，则分装的所有内毒素挑战试验容器均作不合格论处，不得用于去I热原工艺验证。

    将合格的内毒素挑战试验瓶于2~8℃下保存，在四周内可使用。

    (四)内毒素挑战瓶的使用

    1．挑战瓶的位置分布要求严格按照热分布或热穿透试验(物理验证)时的温度探头1分布要求分布挑战试验瓶，尽可能放置在腔室的最冷点处，每只瓶均应做好相应的分布位置l标记，以便于追溯。

    2．内毒素含量测定内毒素挑战瓶经去热原工艺处理后应立即放人已去热原的洁净容器中，密封后送至实验室。如不能及时检测，应于2～80℃保存，并于一周内检测完毕。检测时，向每只挑战瓶内加入适量的鲎试验用水，于涡旋振荡器充分间断性振荡15分钟后，按照细菌内毒素检查法检查，用半定量法测出内毒素的含量。

    3．去热原性能的计算计算出每只挑战瓶的起始内毒素含量的对数值以及经去热原处毫后的内毒素含量的对数值，然后再算出两者之差，即为每只挑战瓶的内毒素所下降的对数单位。每只挑战瓶的内毒素对数下降单位应不得少于3个。

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