培养基、缓冲液和试剂的制备及储存

    微生物实验离不开用于微生物生长、分离、鉴别、保存的培养基和实验中保护微生物细胞的缓冲液、稀释样品或淋洗器具及滤膜用的淋洗液，以及在菌种鉴别中用于生化反应的各种指示剂等试剂。培养基、缓冲液及指示剂等试剂的配制是开展微生物实验的重要基础工作。如果培养基、缓冲液、试剂配制有误，那么由此而得到的实验结果都是不可靠的。因此，有关培养基、缓冲液和试剂的制备也是 GMP 认证中检查、关注的重要内容。

    第一节 制 备

    培养基是指由人工方法配合而成的混合营养物制品。按使用时的不同的形态，培养基可分为：液体培养基、流体培养基、半固体培养基、固体培养基四种。根据不同用途，培养基又可分为：基础培养基、富集培养基、选择性培养基、鉴别培养基、厌氧培养基五类。有关培养基的知识可参考专著《微生物培养基的制造与应用》——中国农业出版社出版1995年第一版。

    医药工业微生物实验室所用培养基可按药典规定检查方法中所列的培养基配方配制。也可使用复合型的于粉培养基，按说明书要求称取适量后加水溶解配制，或是使用已配制且分装好的成品培养基(国内已有法国生物梅里埃公司、美国密理博公司的产品)。所用培养基质量必须符合药典规定的灵敏度检查试验及无菌性检查试验才可用于检验。

    配制培养基、缓冲液、试剂等时，称量要迅速以免吸潮而影响称量的准确性，同时为避免增加培养基等中的金属离子及其他微量化学元素而影响微生物的生长、鉴别，所用器具、容嚣应为洁净玻璃制品，所用溶解用水应为纯水。加热溶解时，不能采用直火加热，特别是培养基会结底碳化而影响营养度和澄明度(可用沸水浴或隔套蒸锅通过蒸汽加热)，不断搅拌以促进培养基充分溶解。

    调节pH值：测定pH值的标准温度为25±2℃。调节pH值可用无菌的mol／L(1N)氢氧化钠溶液或10％碳酸钠溶液、lmol／L盐酸溶液或15％冰醋酸溶液。当调节缓冲液的pH值对，宜用6mol／L(18N)磷酸或．10mol／L氢氧化钾溶液。灭菌前的pH值可比规定要求高出0．2，因一般灭菌后的pH值将会比灭菌前的pH值降低0．2左右。对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH值均进行测定，并记下每次pH值的测定结果，有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性。

    按规定要求分装：大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认。每次使用前后，均要对分配器的管道系统进行冲洗，在分装无菌培养基前，则要采用无菌硅胶管。分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天(2小时内最佳)进行灭菌处理。

    容器封口后用经验证过的灭菌程序灭菌。灭菌程序的参数应记录于高压灭菌柜的使用日志及相应的配制记录中。注意灭菌后物品应有适当措施防止再次污染。制备某些选择性培养基或淋洗液需在使用前向培养基中加入β-内酰胺酶等试剂时，务必确保所加入剂的无菌性和质量保证。

    制备好的培养基、缓冲液等应及时抽取适量用于检查pH值、无菌性、灵敏度等质量是否符合规定。微生物检验用培养基、缓冲液及试剂的配制应有原始记录供追溯检查。所有相关信息包括：名称、处方、原材料、称量数、稀释溶解量、灭菌条件、灭菌程序参数，制备日期、制备人签名、质量检查结果等，都必须在配制原始记录或工作日志上反映出来。

    第二节储 存

    未开封脱水培养基应避光储存于25℃以下阴凉干燥处，开过封的脱水培养基应盖紧置冰箱冷藏储存。已配制好的培养基、缓冲液一般可储存于2—25℃阴凉干燥处，有条件置冰箱冷藏储存更好，否则必须在两天内使用完毕。USP中有明确规定：置2~25℃阴凉干燥处如果培养基分装并储存于非密闭性容器内(如试管、三角烧瓶)，则其使用期限为1个月，但该培养基的灵敏度试验和其他的相关质量检查务必在距使用时的前两周内完成；如果培养基储存于密闭性容器(如螺旋盖瓶)内，则其使用期限为1年，但该培养基的灵敏度试验和其他的相关质量检查须在距使用时的前3个月内完成；如果实验室购买的成品型培养基储存于密闭容器内，实验室可抽取部分代表性样品进行无菌检查试验和灵敏度试验。笔者建议，实验室可根据自已的贮存条件来制定合理的培养基贮存期，对培养基的存储环境条件进行监控和记录，并且要对相应的贮存期和贮存条件进行确认。

    有效期已过的培养基、缓冲液和试剂必须立即丢弃。建议在实验室建立一简易的库存控制系统，有专人保管并建立台账，包括品名、规格、批号、数量、有效期、进货日期、使用日期和数量、以及领用人等信息。

来源：北纳细胞网 www.bncc.org.cn