培养基、缓冲液和试剂的质量控制

    一、外观检查

    在配制后和使用前，务必仔细检查培养基、缓冲液等的颜色和澄明度。培养基经高温灭菌后，颜色往往会稍微加深，但如果颜色过深，则表明灭菌温度过高或时间过长引起营养成分炭化。有些培养基中含有琼脂、卵磷脂等难溶组分，如果配制时搅拌不充分，则会导致培养基混浊，甚至会有颗粒样物质漂浮于培养基中。用于无菌检查的硫乙醇酸盐液体培养基，还必须检查确定其上层(粉红色)有氧层高度不得超过总高度的1/3，否则，须水浴加热煮沸以赶去溶解在培养基溶液中的氧，为保证培养基的营养不被重复加热破坏，只限加热一次。

    二、pH值检查

    灭菌时温度过高或时间过长会使培养基中营养成分降解而使pH值降低，pH值对微生物生长非常关键。这正是我们强调要求在灭菌前、后分别测定培养基pH值的原因。同样，缓冲液、淋洗液及生化反应用指示剂等试剂均须检查其pH值是否在规定范围内。

    三、无菌性检查


    培养基无菌性检查的重要性在于：培养基如果本身染菌将导致实验的假阳性结果。

    抽取一定比例样品，并将其置于按既定用途所确定的条件下(温度，厌、需氧环境)培养3～5天；观察是否浑浊及有菌生长。缓冲液及相关试剂，可按照成品的无菌检查要求用直接接种法或薄膜过滤法进行检查。如果使用成品型培养基，可将所有培养基置于 30~35℃ 下预培养3~5天，以发现并剔除可能由于装运或灭菌期间容器破损而产生的污染培养基。使用前，操作人员务必仔细目检培养基或缓冲液的物理状况，以确定是否存在微生物污染等异常迹象。

 

来源：北纳细胞网 www.bncc.org.cn