培养基及培养条件

    第一节  培养基及培养条件

    环境监测用培养基的类型和培养条件取决于所选用的检测方法，但必须具有广谱性。通常，营养琼脂或大豆胰蛋白胨琼脂培养基属于全能型培养基，正如制药业中的一些研究数据表明，此类培养基适用于多数环境微生物(包括真菌)的分离生长。但是，对专用于酵母菌和霉菌分离生长的特定培养基，仍应另行选择，像玫瑰红钠琼脂、萨布罗培养基等都是常用的真菌培养基。如果被监测环境中使用过消毒剂或有抗生素，则要向表面监测用培养基中加一些添加剂(聚山梨酯／吐温80、卵磷脂、偶氮凝集素或β一内酰胺酶等)，以中和或尽量减少消毒剂或抗生素的抗菌作用。例如，在对非抗生素生产级区环境设施表面监测时，通常是在营养琼脂或大豆胰蛋白胨琼脂培养基内添加 0.7％的聚山梨酯(吐温)80和 0.1％的卵磷脂。

    厌氧微生物的监测是制药业洁净环境监控的一个颇有争议的话题。笔者认为，此类监测进行与否应取决于生产工艺，它更适用于那些大量接触到二氧化碳气体或氮气的工艺。如果环境条件适于厌氧微生物存活，或在无菌检查试验中检出厌氧微生物，则预示此环境中可能有该类微生物存在，那么微生物实验室就应制定针对严格厌氧微生物的特别监测方案。某些专家认为，可以通过初始性评价的方法，对环境中是否存在严格厌氧微生物进行相应监测，据此即可达到检查机构的要求。(在初始性评价阶段)如果环境中未检出厌氧微生物，并且／或者在无菌检查试验中也未检出厌氧微生物，则厂家在日常环境监测方案中完全可以不考虑厌氧微生物的监测。另一方面，如果有证据表明环境中存在厌氧微生物，则要针对严格厌氧微生物进行专门监测。

    对洁净区(室)环境微生物监控用培养基采取相应的质量控制措施。笔者建议，在进行灵敏度试验(促生长检查)时，除了选用药典规定的标准菌株外，还应选用从环境中分离出的代表性微生物来作为测试菌株。即便使用的培养基为外购的成品培养基，且有质量合格证明，仍应对它们进行促生长检查(灵敏度试验)。

    一旦选定培养基，需确定培养温度和培养时间。通常，用于需氧性细菌的培养条件为：32.5±2.5℃下培养48小时以上；用于真菌的培养条件为：22.5±2.5℃下至少培养72小时。对于培养条件的选择目前尚有争论，但多数专家的意见是，由于太多数污染微生物来自人员及环境．所以将培养条件定为在30～35。c下培养48~72小时较为合适。

    第二节  无菌检查用隔离系统的环境监控

    无菌隔离系统的工作原理有别于标准洁净室，对无菌隔离系统进行环境监测的目的及方法也与洁净室(区)的环境监测稍有不同。有关无菌隔离系统的各种定义都指出，无菌隔离系统在不同区域之间提供了有效隔离，并维持其内部环境达到无菌状态，因此目前大多数无菌检查试验的无菌隔离系统都是安置在无特定洁净级别要求的区域内。无菌隔离系统有两大主要优点，一是可以只针对工作区进行清洁消毒，二是可将人员和有菌环境隔离在工作区之外。尽管能有效隔离人员和有菌环境，但对隔离系统的性能评估而言，在消除微生物污染及维持无菌环境的能力方面，环境监测仍起着相当重要的作用。因此，必须建立专用于隔离系统的环境监测方案，以检测系统的工作性能。并及时发现系统是否存在故障。已有证据表明，当出现下列情形时，如手套或操作服上有针孔状漏洞、垫圈及塑料密封件出现缺损、或将带菌物品移人系统内，均会给隔离系统产生微生物污染风险。

    有关无菌隔离系统方面的法规或指南性文件，可参照欧盟GMP，ISO/TC 209以及国际药品生产检查联合会(PIC)的相关检查指南等。

 

来源：北纳细胞网 www.bncc.org.cn