隔离系统的验证-OQ

    一、运行确认(OQ)

    运行确认阶段的目的在于确认隔离器的操作和功能符合标准并适用于无菌试验。该阶段主要包括以下几个部分：

    (一)浮粒子水平测

    试该测试的目的在于检查隔离器内的悬浮粒子水平。一般仅在静态下进行悬浮粒子计数。测试点和取样体积可根据供应商的建议或洁净室的相关标准确定，但结果应符合静态100级区的要求。

    (二)行性能检查

    该检查的目的在于确认提醒和警报功能符合其性能要求。确认系统运行能够遵从所有设定值和可调参数。方法一般为在报警设置点增加或降低参数值使其高于或低于报警设置点的上限或下限以检查报警器是否能报警。

    (三)隔离器的完整性测试(隔离器体和手套)

    该测试的目的在于确认隔离器在日常运行中能维持其完整性，以确保隔离器在使用灭菌化学试剂时的安全性。隔离器完整性包括隔离器舱体和手套或半身操作服的完整性。测试原理一般都是通过测试系统的泄漏性来反映完整性。其中一个简单易行的方法就是压力下降试验。该方法是预先在隔离器系统中保持一定的压力，然后快速关闭系统中所有的进气口与出气口，包括隔离器自身的空气处理系统也应关闭，让该状态持续一段时间，如10分钟，假如隔离器系统完整性完好，在这特定时间内，压力下降值应在一定的要求范围内；反之，则不符合规定。该试验简单易行并且灵敏度高，但是它只能反映出隔离系统完整性是否有破损，却不能指示破损处的具体位置，因此还应该辅助以其他的测试以进一步确定破损处。氨水试验就是这样的试验之一。在氨水测试中，将装有浓氨水的容器放置在有一定压力的隔离器舱体中，并在出风口处悬挂一条指示布做阳性对照，这样当氨气在舱体中快速地弥漫到每一个角落时，出风口的指示布就会变色；用同样的指示布仔细擦拭隔离器舱体外表面的每一个地方，在有泄漏的地方，指示布则会和泄漏出来的氨气发生变色反应，从而准确地指示该地方有泄漏。氨水测试既能测试隔离系统的完整性还能准确地定位泄漏位置，但是试验后在隔离器舱体中会有少量氨气残留，这样就会和酸性灭菌剂发生中和反应，从而影响消毒效果，因此，氨水测试后，隔离系统内应充分排风以除尽氨气；确保酸性灭菌剂的灭菌效力不受影响。

    手套的完整性是隔离器完整性测试中的另一个重要部分，因为手套即接触无菌试验材料又接触测试样品，然而在使用过程中有时即使压降试验合格，手套上也有可能存在着难以发现的极微小的破洞，这样就有必要定期专门检查手套的完整性。现在国外市场上有几种手套测漏仪出售，操作人员应确保在最接近实际使用情况的条件下用测漏仪测试手套；这里需要指出的是标准的“手印试验”的灵敏度可能并不足以查出手套上极低水平的污染及破损。

    另外，隔离器在正常运行时需维持20~50pa或以上的正压，以防止可能发生朽染。如果需要维持恒定的正压，验证时必须证明隔离器能维持和控制设定的正压值。

    (四)灭菌器的功能，灭菌过程参数

    该测试确认灭菌器的功能符合既定要求。这些参数包括灭菌剂每小时的消耗量，灭菌剂升温至所需温度所需的时间等，还包括厂商提供的反应灭菌器功能的其他参数。

    (五)灭菌程序确认

    该过程目的在于确认所执行的灭菌程序各步骤正常，运行值和设定值相符。

    在隔离系统中，可以使用不同的灭菌方法来对系统及试验用品进行灭菌，目前用于隔离器灭菌的化学试剂有：过氧乙酸、二氧化氯、臭氧和过氧化氢，每一种试剂对于暴露条件、过程控制都有不同的要求。因此．应严格遵从生产厂商的使用要求选择合适的灭菌方法，并在性能要求中对该方法进行详细描述。例如，当过氧化氢蒸气被用作灭菌剂时，控制房间的温度和湿度以及隔离器内的温度就很重要。因为要在冷凝点下保持一定的气体浓度，温度是关键。而其他一些灭菌化学试剂，例如二氧化氯和臭氧，则需要在灭菌前增加隔离器内的湿度。如果需要较高的相对湿度，那么在运行确认中必须对相对湿度的控制能力进行确认。

    确认灭菌化学试剂的浓度与分布是 OQ 阶段中的另一个重要部分。对于灭菌剂的气体或蒸气形式，其浓度可用化学指示剂、光谱分析或电子传感器测量来测量，分布情况也可以用化学指示剂进行测试，但是必须明确的是化学指示剂仅能提供定性的而不是定量的信息。气体和蒸气灭菌的过程中，一般都会由风扇使隔离器内的灭菌试剂分布均匀。由于在隔离器舱体中的架子、设备、手套和袖子以及半身操作服对气体分布有影响，所以应调整这些风扇的位置及方向以获得最佳的气体分布状态，并且必须在隔离器满载设备和试验器具时进行灭菌气体分布检查，由此确定待灭菌器具的装载方式并进行记录。

    许多隔离系统中，把较小的可移动的传递隔离器作为物品灭菌装置，测试样品和试验器具先在这些传递隔离器中用灭菌化学试剂去除表面微生物，再通过双门快速传递口 RTP传递到试验隔离器中进行试验。因此，在对这样的隔离系统进行运行确认时，还应确定传递隔离器的物料装载方式，并画出或拍下装载的放置图。由于隔离器中的灭菌试剂仅在物体的表面起作用，因此任何不能完全暴露在灭菌气体中的表面就会得不到处理，从而可能会有残存的活的微生物。应当把物料放入传递隔离器之前用灭菌剂充分擦拭待灭菌物品表面(前提条件是该表面不会渗透灭菌剂)，尤其是有皱褶或是有覆盖物的表面。

    灭菌程序完成后，要将灭菌试剂从隔离器中排除，使隔离器内的残留灭菌试剂量为安全浓度。排除过程可通过由灭菌器或其它方法提供(如：隔离器自身的空气处理系统)的新鲜无菌空气进行替换来完成。排出的灭菌气体既可以通过开放式管道由排气孔直接排向大气，也可以在密闭程序管道中，由灭菌设备将灭菌试剂去除和破坏后再排出。假如排风系统中使用了开放式管道结构，还应检查排风系统的气流与安全性。

    当灭菌程序的确认完成以后，就可以根据确认好的灭菌程序进行下一步工作，既灭菌程字的开发过程。

    (六)灭菌程序的开发

    灭菌程序开发的目的在于确定日常灭菌程序中所必需的过程控毒参数。任何用于灭菌过程验证的常用方法，包括阴性分数法和过量杀灭法，都可使用。在这个过程中，生物指示剂被用来挑战灭菌过程，生物指示剂的芽胞数和对灭菌条件的耐受力直是已知的。如果条件许可，还应测试生物指示剂的实际D值(参见USP26<55>生物指示剂一耐受力性能测试)，但也可以接受生物指示剂供应商提供的D值。用于隔离器内表面，无菌试验器具和试验样品的灭菌方法应能使这种具有高耐受性的生物指示剂至少下降6个对致单位．并且应具有重现性。致死率可用阴性分数法或过度杀灭法来计算，阴性分数法适用于每个芽胞条的芽胞数为10⁵或更多的生物指示剂，过度杀灭法适用于每个芽胞条的芽胞数为l旷的生物指示剂。开发测试项目至少包括以下几个方面，隔离器中灭菌试剂的分布以及灭菌时间和灭菌程序完成以后的灭菌试剂排空时间；假如有传递隔离器，还应测试传递隔离器在满载状态下的上述项目。只有在OQ测试结束并获得批准之后，才能进行PQ阶段的测试。

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