培养基灌装验证(三)

    九、环境控制

    无菌生产区的环境确认和验证是无菌生产工艺验证的前提条件。无论是静态还是动态，均须对无菌生产区环境进行全面监控。进行培养基灌装时的环境监控资料对整个工艺验证的评价和偏差分析起到非常关键性作用。因此，培养基灌装时的环境监测资料也是评价无菌工艺验证的重要依据之一。

    十、结果评价

    培养基灌装结果的评价是无菌生产工艺验证中的一个焦点。由于对合格标准的理解存在差异，同一个数据往往会有不同的理解结果。美国药品和食品管理局(FDA)对无菌药品的污染概率作如下规定：

    最终灭菌药品的无菌保证水平(SAL)不得低于10^-6，即污染概率不得超过1/百万；

    无菌灌装药品的无菌保证水平(SAL)不得低于10^-3，即污染概率不得超过1‰。

    实践证明，对设计合理并且生产操作环境能得到良好控制的无菌生产线而言，其产品污染率维持在1‰以内并不难。企业须通过培养基灌装试验来证明其无菌生产线所生产的无菌产品的污染概率始终维持在这一水平以下。通过试验应能证明，在95%的置信限，产品的污染概率不超过1‰。值得注意的是，尽管您的验证结果表明您的无菌保证水平达到10^-3，但并不表示药政部门允许您的上市产品每一千瓶中可以有一瓶是污染品。相反，这只不过是通过验证数据计算出的可接受污染概率的理论值。

    有些企业草率地将每批培养基灌装试验时的实际污染率定为他们的合格标准，例如，有人认为一批灌装了3000瓶培养基中有3瓶污染品(污染率为0.1％)是合格的，其实这是不对的。因为它不符合验证试验的统计学要求。在此，我们有必要先弄清计算产品污染率的统计学概念。

    如果某批培养基(数量为 N )试验中有 R 个污染品，那么培养基的污染率 p = R/N。在一足够大的样本中，估计比率 ^-P 以实际比率 p 为中心呈正态分布。其标准偏差：SD = ，其中 q = 1 一 p 。那么，产品的污染率有95％的可能性落在 p ± 1．96SD 范围内。以上述培养基灌装数据为例，以95％的置信限推断，实际产品的污染率范围：

    即，产品的实际污染率有95％的可能性在 0 至 0.2％ 之间。

但是，从质量保证角度考虑，我们必须严格控制污染率的上限而不必分析其下限。由此可见，批培养基污染率为1‰时，并不能保证产品的无菌保证水平(SAL)不低于10^-3。

    表13—2给出了当可信限为95％、时，一次培养基灌装试验中，灌装数量、污染数量与污染概率之间的关系，企业可参照它制定自己的警戒限度和纠偏限度。

    十一、偏差调查及纠偏措施

    验证试验结果超过限度是无菌工艺验证中的最大难题。这需要进行大量的偏差调查并采取有效的纠偏措施。根据实际经验，在此列出了一套出现偏差后的调查和纠偏方案。

    (一)偏差调查

    1．检查所有与培养基灌装用物品相关灭菌设备的验证资料和灭菌记录。

    2．检查培养基灌装时的环境监控资料，包括空气悬浮粒子、空气浮游菌、空气沉降菌、表面微生物以及操作人员的卫生监测资料。

    3．将培养基中污染菌和环境监测时所监测到的微生物逐一鉴定到种，并比较各个污染菌彼此间的相关性。

    4．检查相关产品无菌试验结果呈阳性的历史资料，看其污染菌与培养基验证试验中的污染菌是否一致。

    5．检查以往的培养基灌装资料，看其中的污染菌是否重复出现。

    6．检查培养基灌封用容器及胶塞的完好性。

    7．检查培养基灌装时无菌洁区的压差记录，是否符合常规。

    8．检查培养基灌装时的维修和清洁记录。

    9．检查培养基灌装时的批生产记录和设备运行记录。

    (二)纠偏措施务必要仔细回顾和分析所有的培养基灌装资料及其相关资料，以准确找出本次偏差的真正原因。尽管环境监测时能监测到微生物，但多数情况下，也很难发现其与实际偏差有直接的相关性。一旦出现偏差并完成其调查后，须立即实施纠偏计划。以下列出了一些在实施纠偏计划时的基本操作程序。

    1．增加培养基的灌装数量和环境监测数据以查明污染源。

    2．加强无菌生产环境的清洁和消毒措施。

    3．增加灌装前静态下的环境监控数据以检查无菌环境条件的可靠性。

 
    4．用培养基中的污染菌对消毒剂进行挑战性试验，以检查污染菌是否对消毒剂有耐受性。

    5．分别于灌装前、灌装时及灌装后，增加对操作人员的卫生监控(手套表面微生物和操作服表面微生物)。

    6．增加培养基的灌装批次，以检查所出现的偏差是否具有偶然性。

来源：北纳细胞网 www.bncc.org.cn