微生物自动化分析仪(二)

     四、具体使用指导

     (一)上机前的标本处理

     微生物检测是一门操作性很强的学科，虽然全自动、半自动微生物分析仪能快速进行细菌的鉴定和对抗生素的敏感性检测，但标本的前处理仍然需要手工操作，如分离培养、革兰染色、氧化酶试验、触酶试验、凝固酶试验等，只要其中一项操作发生错误就会造成上机的测试卡选择错误，从而造成鉴定结果的错误，因此，实验人员必须对以上的手工操作部分熟练掌握。而其中最易出错的环节通常是最基本的操作——革兰染色。原因大多数是制片厚薄不当、染色时间控制不好(特别是脱色时间)，其次是对细菌形态识别经验不足(特别是对革兰阴性短杆菌)因此操作中建立阳性控制对照是有效避免革兰染色和细菌形态识别出错的重要措施。

     (二)正确使用仪器

     应由富有微生物分析经验的并通过培训后能正确了解仪器的基本构造、仪器的检测原理、熟练掌握仪器的维护保养工作的实验人员使用。使用中应特别注意以下几点：

     1．上机测试的细菌必须是18。24小时的新鲜纯培养物，并通过革兰染色镜检确定过的。因为所用的标本如不纯或菌龄过老或过于陈旧，将会造成各项生化反应结果的偏差，导致不能鉴定或错误的鉴定结果。

     2．正确选择测试卡。全自动微生物分析仪的测试卡种类较多，不同的细菌有不同的测试卡，应根据上机前标本处理的结果，正确选择合适的测试卡并根据需要尽量提供仪器无法测试的氧化酶试验、触酶试验、凝固酶试验、菌落溶血等的情况。

     3．上机用的生理盐水必须是无菌的，避免杂菌干扰。

     4．按要求的浓度正确配制菌悬液。菌悬液的浓度过高或过低均会影响生化试验的结果，从而影响鉴定结果的准确性。

     5．当菌悬液经真空吸人测试卡片内后，要仔细检查片上各小iL内是否有气泡，如有应排除以避免影响仪器检测的结果。

     五、结果的分析与验证

     应运用所掌握的微生物知识对仪器鉴定的结果加以分析与验证以确认无误后才能发鉴定报告。主要从以下方面进行：

     (一)细菌鉴定结果与原始平板上的菌落对比

     包括菌落的形态、大小、色素、溶血等情况应一致。

     (二)鉴定结果与标本来源核对

     分析该菌株是否为常见污染菌。如为罕见菌，则要慎重，必要时用关键性的试验(靛基质试验、动力试验等)进一步确认，特别是当结果不符合常理时应进行手工鉴定来判断。

     (三)用药敏试验结果验证

     对仪器药敏结果进行分析不但可以检查药敏试验结果本身的的问题，同时还可以以此对某些细菌的鉴定结果加以验证。如 VITEK (AMS系统)全自动微生物分析仪具有专家系统，其功能为监测操作技术上的问题及提示、注解菌种与药物敏感试验的关系和提供常规的耐药模式信息等。因此，首先要浏览电脑中专家系统的提示或注解，再结合自己掌握的抗生素知识加以综合分析。当发生不能确定的情况时，用手工法验证药敏试验结果。

     六、利用自动分析仪软件资料对环境、工艺中的污染进行监控

     VITEK软件具有强大的资料处理系统，医药工业微生物实验室可利用以下统计对环境、工艺中的污染进行监控。

     (一)种分离率统计

     将一段时间范围内的菌种分离率作概括性的统计。可根据需要将菌株来源、部位等分类统计菌种分离率，对于不寻常菌群的增加及变化就可一目了然，快速判断与发生污染的关系。还可以统计某菌株在在12个月份中出现的频率及其占所有菌种分离的比例，由年度各月份的菌种分布情况可监测某一菌种的出项频率，从而比较去年及预测明年的情况，作为微生物控制的基本资料。

     (二)菌株生化反应率的统计

     分析仪在鉴定细菌时是由其生化反应的结果得到一个生物编码，再依此编码的到菌株的名称，而某些生化反应的极微小差异即可造成生物编码的改变。通过统计同一菌株的不同编码的出现的频率，可及时发现菌株的变异情况。及时调整清洁、消毒、灭菌的措施。

     七、自动化仪器的局限性

     自动化分析仪虽然具有操作简便、结果准确、速度快等优点，但是也存在很大的局限性。微生物是有生命的并处在不断的变异、进化中，它的各种性状也会随之发生变化，加上细菌的耐药性，因此微生物的检验过程是复杂的，这就要求分析仪的数据分析软件要不断苎更新才行。事实上还做不到这一点，这就需要增加手工检测作为仪器分析的有效补充：其次，除了上述上机前的标本处理必须手工完成外，一些菌种间的鉴别还需要做关键性的手二补充试验(靛基质试验、动力试验等)才能使仪器完成最后的鉴定。再者VITEK(AMS系统)对某些非发酵菌的鉴定存在缺陷，常常无法鉴定；对一些具有特殊生化特性的菌株芝茎定容易出错；在检测链球菌药敏上也存在很多不足。因此，我们应在正确使用仪器的目毒．认识手工操作的重要性，加强手工鉴定的操作基本功。

     来源：中国微生物菌种网 www.bnbio.com