细胞培养常用pH调整液的配制方法

     一、pH调整液

     在许多情况下，为了营养成分稳定和延长储存时间，在配制营养液时都不预先加入 NaHCO₃ 而在使用前再加入。因此，NaHCO₃ 都是单独配制及消毒除菌。此外，为了维持培养液恒定的 pH，以利于细胞的生长和增殖，还可利用 HEPES 作为添加剂。

     1．NaHCO₃液：常用的浓度有 7．4％、5．6％、3．7％ 三种，配制时，用三蒸馏水溶解后，过滤除菌，分装小瓶，盖紧瓶塞，4℃冰箱或室温下保存。或用 10 磅 10min 高压蒸气灭菌亦可；可能有部分 NaHCO₃ 被破坏，但操作简单方便。消毒后要迅速封上瓶口，以免 CO₂ 逸出。调节溶液 pH 时， NaHCO₃  液要逐滴加入，并不时搅动培养液，以防加入过量，使 pH 过度增高，如溶液内含有酚红指示剂，可按颜色变化判定。当pH 超过后，可用高压灭菌的 10％ 醋酸溶液或通入 CO₂ 气体进行调节。

     2． HEPES 液： HEPES 可按照所需的浓度，直接加入到配制的培养液内，再过滤除菌，通常配制成 500mmol／L的浓度：

(1)用 200mml 双蒸水溶解 47．6g  HEPES，用1mol／L。NaOH调节 pH 至 7 ．5～8．0 。

(2)过滤除菌后，分装小瓶，室温或4℃保存。

     使用 HEPES 时，由于细胞的代谢作用，培养液很快变酸而成黄色，pH 下降。另一方面，在细胞接种量少，生长缓慢时，pH 要上升。这些对细胞的生长都不利，可以及时更换培养液，但培养基中营养并未耗尽，因此只调 PH 即可：调 pH 除用 NaHCO₃  外亦可用氢离子缓冲剂．它们能较长时间控制恒定的 pH，HEPES 就是其中的一种。HEPES 具有较强的缓冲能力．使用最终浓度一般为 10~50mmol/L 可以根据缓冲能力的要求而定。

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