球红假单胞菌的培养及生物学特征(一)

    原标题：球红假单胞菌的选择、培养及生物学特征

    一、球红假单胞菌

    球红假单胞菌为土壤腐生菌，属于胞壁含诺卡氏枝菌酸的放线菌。该菌属最大的特点是其代谢底物的多样性，尤其是对疏水化合物的代谢，如烃类、木质索、类固醇、款化酚醛塑料、煤和石油等。因此．球红菌在整个环境的物质循环和代谢中起着重要的作用，但有些球红菌对人类、动物和植物具有致病性。

    球红菌具有代谢多种有机化合物的能力，代谢底物的广泛性和多样性使其在生物整治和清洁生产方面具有广阔的应用前景，如用于褐煤、高硫煤和石油的处，降低重油的黏度和提高石油的回收利用率等。虽然到目前为止，球红菌成功地应用于工业化的程度还很有限，但是现代生物技术的发展为这方面的深入研究提供了可能，并已经取得了许多可喜的成绩。

    球红菌对一些有机化合物的代谢途径、代谢动力学、代谢产物眦及代谢的分子生物学机理等，很多都已研究清楚，为以后的工业化应用奠定了基础。随着人们对环境保护越来越重视，球红菌无论是在生物整治方面，还是清洁生产方面．都逐渐成为令人瞩目的极具应用价值的菌属之一。

    试验所用菌种取自中国矿业大学化工学院的保存菌种。密封，置于冰箱中。

    本研究的目的就是用微生物降解转化煤炭，使煤炭发生降解或转化成小分子类物质。由于球红假单胞菌具有繁殖快、无毒、中性环境等特点，另根据资料显示假单胞菌具有攻击煤中大分子结构单元，降解多环芳烃的能力以及光合细菌在水生态系统中具有利用和转化多种有机物和无机物的能力，故选择同时具有这两种优势的球红假单胞菌来进行煤炭的微生物降解转化试验研究。

    二、球红假单胞菌的培养基

    1. 球红假单胞菌培养基的组成

    (1) 普通固体培养基

    培养基的成分及配方见表4—1所示。

    (2)普通液体培养基

    其成分同固体培养基成分类似．只是少了琼脂。

    2. 培养基的消毒灭菌

    培养基的消毒灭菌如培养基的消毒灭菌中所述。

    三、球红假单胞菌的生物学特性

    1. 球红假单胞菌的生物学特性：

    (1)形态与染色

    细胞成球形，直径为0．7～4．0μm。在含糖培养基中，细胞成卵形，直径为2．0～3．5μm。年幼培养物以极生鞭毛运动，在碱性培养基中．运动停止，并产生丰富黏液，以二分分裂繁殖，代时144min。若为革兰氏阴性，鞭毛染色可被发现。球红菌喜聚集在一起。成大球形。


    (2)培养特性

    光能异养菌，兼性厌氧；可在光下厌氧生活，也可在黑暗下好氧生活。营养要求不高，可长在具有简单有机物和碳酸氢盐的矿物培养基中。在简单的有机底物中加人酵母膏最适生长；pH值范围：6．0~8．5，最适pH=7；最适生长温度：25～30℃。在有空气培养时菌液呈红色，大多数培养物产生一种水溶性的卟啉类的蓝红色素，可使液体培养基呈现出暗棕红色。菌落较整齐，稍凸起，多数菌株为光滑型。

    2. 球红假单胞菌的活化与培养

    该保存菌种处于低温避光的休眠状态，且保藏期较长，菌的活性较差，使用时必须对其进行恢复培养。具体方法如下：先用无菌吸管吸取0．3～0．mL保存液体培养的菌种。移植到斜面培养基上，并置于生化培养箱中，恒温旋转振荡培养。经过数次转种，菌种恢复正常生长。

    活化后的球红假单胞菌在液体培养基和固体培养基中进行培养。液体培养条件及步骤如下：首先，在250mL三角烧瓶中加入100mL，培养基，121℃灭菌后接种一定量的纯种球红假单胞菌。然后．在28℃、120r／min的旋回振荡器上进行振荡培养。由于球红假单胞属光能异养菌，兼性好氧；可在光下厌氧生活，也可在黑暗下好氧生活。在有氧黑暗状态下可以生长，故采用有氧状态进行培养，白天放入培养箱中，晚上没有光照的情况下庄振荡器上振荡一段时间，以补充球红假单胞菌生长所需的氧气。培养过程中用显微镜对培养液不染色直接进行肉眼观察。培养一天后发现培养液中有大量菌体活动，菌体呈球形。同时观察到很多菌重叠在一起呈长条形或球形，单个菌体呈螺旋状态运动，剧烈且无规则。

    固体培养是将该菌划线接种至固体琼脂培养基上，用于菌落形态等生物学特性的观测研究。

    来源：中国微生物菌种网 www.bnbio.com