培养基的制备

  不同培养基制备的过程不完全相同，但其制备程序基本相似，可分为调配、溶解、校正pH、分装、灭菌、质量检验及保存等步骤。
 

  1．调配  按培养基配方准确称取各成分的用量，混悬于装有定量蒸馏水的锥形瓶中，振摇混合。有些成分，如指示剂、抑制剂等应在校正pH后方可加入。
 

  2．溶解  将调配好的混合物加热使其完全溶解。如有琼脂成分，应注意防止外溢。溶解完毕，注意补足失去的水分。
 

  3．校正pH  用pH比色计或精密pH试纸进行校正，一般将pH调至7．2～7．6，亦有酸性或碱性培养基。培养基经高压灭菌后其pH可发生0．1～0．2的变动。如用NaOH校正，高压灭菌后pH下降0．1～0．2；若用Na₂C0₃校正，高压灭菌后pH升高0.1～0．2。商品干燥培养基一般已校正pH，用时无需再校。
 

  4.分装根据需要将培养基分装至不同容量的锥形瓶、试管等容器中。分装量不宜超过容器的2／3，以免灭菌时外溢。
 

  (1)液体培养基：分装量为试管长度的1／4～l／3，灭菌后直立待用。
 

  (2)半固体培养基：分装量约为试管长度的1／3，灭菌后直立凝固待用。
 

  (3)琼脂斜面：通常在溶解后分装于试管，加塞灭菌后趁热摆放成斜面，斜面长度约茭试管长度的2／3。
 

  (4)琼脂高层：分装量约为试管长度的1／3，灭菌后直立凝固待用。
 

  (5)琼脂平板：培养基高压灭菌后冷却至50～60℃时，以无菌操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平板，待琼脂凝固后将平板翻转，置4℃冰箱保存备用。倾注培养基时，切勿将平皿盖全部打开，以免空气中的尘埃及细菌落入。新制成的平板表面有冷凝水，不利于细谨分离，故通常将平板置于35℃温箱30分钟左右，待平板表面干燥后使用。
 

  5．灭菌不同成分、性质的培养基可采用不同的方法灭菌。
 

  (1)高压蒸汽灭菌法：由耐热物质配制成的培养基(如普通琼脂)常用此法灭菌。通伟在一个大气压下，当蒸汽压力达到103.4kPa时，温度可达121.3℃，维持15～20分钟即可杀死细菌的繁殖体和芽胞；含糖培养基以68.95kPa，10～15分钟为宜，以免破坏糖类物质。
 

  (2)间歇蒸汽灭菌法：不耐高热的物质配制成的培养基，如糖类、明胶、血清、鸡蛋及牛乳等常用此法。将需灭菌物置于流动蒸汽灭菌器内，使温度达到80～100℃，维持15～30分钟，杀死其繁殖体，但芽胞尚有残存。取出后置35℃温箱过夜，使芽胞变成繁殖体，次日再蒸，如此连续三次，可达到灭菌目的。若有些物质不耐100℃，可将温度降至75～80℃，并适当延长加热时间，也可达到灭菌目的。
 

  (3)滤过除菌法：对高营养液态的不耐热培养基，如血清、细胞培养液等，可用滤过除菌。
 

  (4)血清凝固器灭菌法：含有血清、鸡蛋的培养基可用血清凝固器进行间歇灭菌。
 

  6．质量检验每批培养基制成后须经检验方可使用。质量检验包括两方面内容：①无菌试验：将灭菌后的培养基置35℃温箱培养过夜，判定是否灭菌合格；②效果柃验：按不同的培养要求，接种相应菌种(符合要求的标准菌株)，观察细菌的生长、菌落形态、色素、溶血及生化反应等特征，判断培养基是否符合要求。
 

  7．保存制各好的培养基应注明名称、制作日期，存放于冷暗处或4℃冰箱，一般不超过七天，如用塑料袋密封，保存期可延长，但至多两周。培养基校正pH后如有沉淀或混浊，需过滤澄清后方可使用。液体或半固体培养基常用滤纸过滤，固体培养基趁热以纱布过滤。细菌培养是一项专业性很强的技术。不仅要有坚实的细菌学理论基础，还要有熟练的操作技能和严格的无菌观念。

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