分辨染色体和姐妹染色单体互换技术

  1.分辨染色体技术
 

   淋巴细胞经过含有PHA的培养液培养，在体外便可获得丰富的生长活跃、含有丝分裂细胞的细胞群，当细胞增殖到一定数量时，加入5-氟尿嘧啶核苷(5-fluomuridine，Frdu)和尿嘧啶核苷(uridine)阻断DNA的合成，待细胞同步在S期后加入胸腺嘧啶核苷(thymidine，TDR)使细胞有丝分裂继续，进入分裂期后加入染色体缩短抑制剂溴化乙啶(ethidium bromide，EB)，并加入秋水仙胺破坏纺锤丝的形成，从而阻止到较多具有550～850条带及以上的分裂象，进行人类染色体高分辨分析。
 

   应用高分辨染色体显带技术，可以显示微小的结构性染色体畸变，一般来讲，550条带左右的高分辨染色体可分辨出大于10Mb的染色体结构畸变，弥补了常规染色体分辨率低的不足，从而提高了染色体异常检出率。但是，高分辨技术仍然存在着一定的局限性，若要检出10Mb以下的染色体异常，仍需结合FISH和基因芯片等技术方能达到目的(图2-1-6)。
 

          
 

   2.姐妹染色单体互换(SCE)技术
 

   姐妹染色单体互换(SCE)是指一条染色体的两条姐妹染色单体之间同源片段的交换。这种交换是对等的、完全的，而且是对称性的。它实际上表示染色体复制过程中DNA取链的等位点交换。因此，它能敏感地显示DNA的损伤。1973年Latt等发现，在含有5-溴脱氧尿瞳啶核苷(5-bromodexoy．uridine，BrdU)的培养基中生长的两个同期细胞，其染色体标本经某些荧光染料或Giemsa染色后，在姐妹染色单体之间显出不同的着色强度，从而可用来检测SCE。SCE分析为染色体的分子结构、DNA复制过程，DNA损伤与修复、细胞周期动力学以及检测多种诱变致癌剂等研究领域提供了新的手段(图2—1—7)。
 

           

来源：北京标准物质www.biaowu.com