大肠杆菌质粒DNA转化细胞

　　【来源/作者】北纳创联 

　　在自然条件下，很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，但在人工构建的质粒载体中，一般缺乏此种转移所必需的mob基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。

　　1. 氯化钙法

　　氯化钙处理受体菌(如大肠杆菌)，可诱导短暂的“感受态”，使之具有摄取外源DNA的能力，从而能摄取不同来源的DNA。有关氯化钙转化的原理机制，目前尚无公认的定论，有假说认为钙离子使细胞膜磷脂层形成液晶态，促使细胞膜与内膜间隙中部分核酸酶解离，诱导形成感受态。

　　此外，钙离子能与转化混合物中的DNA分子结合，形成抗脱氧核酸酶的羟基．磷酸钙复合物，黏附于细胞表面。42℃热休克，细胞膜的液晶结构发生扰动，出现间隙，使外源DNA进入。

　　2. 电穿孔高效转化法

　　高压电转化是目前效率最高的质粒DNA转化大肠杆菌和分歧杆菌的方法。当质粒DNA与受体菌放入盛有缓冲液(无盐或低盐的溶液)的转移电极杯中，在瞬间通入高电压时，受体菌处于电体克状态，此时膜通透性增加，质粒DNA就易从膜孔进入受体茵中。

　　在上述方法中，氯化钙法简单、快速、稳定、重复性好，菌株适用范围广，感受态细菌可以在一70℃保存，因此被广泛用于外源基因的转化。电穿孔法不需要预先诱导细菌的感受态，依靠短暂的电击，促使DNA进入细菌，转化率最高能达到10⁹～10¹⁰转化子／闭环DNA，但需要使用电穿孔仪。

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