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秋天，是一个收获的季节, 更是一个表达情谊的季节，明媚的夜空下，迷人的月光里，所有人共享一轮圆月，传递最真挚的情谊。值此金秋佳节，北纳与您真情约惠！

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互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子的过程称为杂交。其基本原理就是应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA(或RNA)片段按碱基互补关系，形成杂交双链分子。

在自然条件下，很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，但在人工构建的质粒载体中，一般缺乏此种转移所必需的mob基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。

碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH 4.8的醋酸钠／醋酸钾高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质．SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。碱裂解法是较常用的质粒DNA提取方法，其优点是收获率高，适于多数的菌株，所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。

HNO3 是唯一可以单独使用的消解用酸， 常压消解体系及微波消解体系都将其作为基本消解用酸， H2O2在消解过程中与 HNO3 混合能够提高HNO3的氧化性并能促进生物体纤维的分解， 因此选择HNO3–H2O2消解体系进行样品消解。

分别称取 5.000 g 左右打浆均匀的鱼肉、 河蚌新鲜样品、 0.500 0 g 左右的牡蛎标准物质置于消解罐内， 加入 10 mL 硝酸和 5 mL过氧化氢， 静置过夜。将消解罐密封后放于微波消解仪内， 按表 3 设定微波消解参数进行样品消解， 消解完毕后待消解罐温度降至 80℃， 将消解罐取出、 放气， 置电热板上以 120℃左右赶酸至近干， 待冷却至室温后将样品消解液用纯水定容至25.0 mL。

监控是有计划、有顺序地连续观察或测定，以判断CCP是在控制中，并有准确的记录，可用于未来的验证评价。应尽可能通过各种物理及化学方法对CCP进行连续的监控，若无法连续监控关键限值，应有足够的间歇频率来观察测定CCP的变化特征，以确保CCP是在控制中。

随着我国饮食习惯的变化．生食的肉类和水产品逐渐增多，而且此类食品由于没有经过热加工工艺或加热不彻底，携带的或污染的微生物不容易去除，一旦存在致病微生物其危害较大．因此该标准强化了生食肉制品和水产制品的致病菌限量要求。

致病菌是能够引发消费者疾病的细菌，包括沙门氏菌、单核增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157：H7等。食品被致病菌污染而引发的食物源性疾病，严重危害消费者的健康及生命安全。据中国知网(CNKI)统计，我国2005年一2011年有文献报道的1503起由致病菌引发的食源性疾病事件中．由肉和肉制品、水产品和米面制品引起的食源性疾病位列食品类别的前3位；从致病原因上分析．以副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌为首。食源性疾病事件的发生与消费者的饮食和卫生习惯关系密切，如副溶血性弧菌中毒主要是由于生食或食用加热不彻底的水产品所致。因此针对不同类别的食品，综合考量我国的饮食习惯．设置不同食品中不同类别微生物的限量指标就显得尤为关键。

FTIR谱图分析得出：硝酸处理煤与原褐煤在波数为17l3cm-1的地方出现了较强的峰，在波数为1538cm-1和1171cm-1的地方出现了相对较弱的峰。对照谱图解析，主要是增加了芳香烃1，2一二取代和1，2，4三取代羰基……C一O含氧官能团，还有酚、醇、醚、酯的C一O的吸收蜂这种含氧官能团增加了，说明煤有了一定程度的氧化。

由图还可以发现，沉淀物的总失重率都高于其他三种原料的失重率，即可获知沉淀物的挥发分较大。总失重率的大小顺序为沉淀物>硝酸处理煤>原褐煤>煤渣。这四种样品起始的热分解温度差不多，都比较低，说明它们的热稳定性都很低；而热分解终止温度沉淀物5其他三种样品相差较大，前三种的热分解终止温度在550℃左右，沉淀物的热分解终止温度是672℃左右，相差约120℃，说明褐煤降解后所得的降解产物即沉淀物热分解时间比较长。

由硝酸处理煤样的XRD图谱可以看出，硝酸处理煤样中的矿物质成分含有大量的石英、少量的高岭土和赤铁矿，以及矿物质方解石；而褐煤降解后的沉淀物只含有很少量的石英和硬石膏；褐煤降解前后所含矿物质发生很大的变化，具体如以下XRD图谱所示。

黄孢原毛平革菌与球红假单胞菌原生质体跨界融合子生物降解转化硝酸处理义马褐煤在降解转化时间为5d时达到最大，(加盐酸沉淀)生物降解转化率和(煤沉淀)生物降解转化率分别达到72．61％和84．47％。融合子生物降解转化义马褐煤在降解转化时间为7d时达到最大，生物降解转化率达到52．28％。

取球红假单胞菌与黄孢原毛平革菌的原生质体制备液0．5mL，混匀，10000r／min离心5min，弃去上清液，用SMM缓冲液洗涤双亲原生质体混合物3次后加入配置好的不同浓度的融合液，按照表5—4正交实验安排实验。实验终止后，10000r／min离心,’5min除去PEG，将沉淀用SMM缓冲液洗涤3次后悬浮在1mL SMM液中。将菌液涂布到选择培养基平板上，30℃培养4d后计算菌落数。同时将双亲原生质体混合物用SMM缓冲液稀释106倍，分别涂布高渗再生培养基和固体基础培养基平板上，30℃培养4d后计算菌落数。

活化出发菌株和融合子后，以鉴别培养基制成倾注平板后，置于28℃培养箱内培养观察。

取酶解120min的原生质体，用渗稳剂稀释至106个／mL，而后将装有5mL菌悬液的无菌试管置于小烧杯中，杯内加水浸没试管中的菌液，再将小烧杯放在微波器(2450MHz，650W)中进行微波处理，通过每10s换一次水的低温热分散法来抵消热效应，处理时间梯度为：10s．20s·30s，40s，50s。将处理过的原生质体适当稀释，涂布平板，计算致死率。

取酶解120min的原生质体．用渗稳剂稀释至lO6个／mL，取5mL菌液放在直径为9cm的无菌培养皿中，将培养皿置旋转圆盘(33r／min)上，并使其距离紫外灯30cm处，处理时间梯度为：20s，40s，60s，90s，120s，150s。紫外照射后，暗修复2h，以免引起细菌的光修复。将处理过的原生质体适当稀释，涂布平板，黑暗避光培养，计算致死率。

微波辐射诱变球红假单胞菌(原生质体)的煤炭生物降解转化结果是：原生质体辐射处理时间为l0s时，球红假单胞菌对义马褐煤的降解转化率达到最大，为38．68％；原生质体辐射处理时间为30s时，球红假单胞菌对硝酸处理褐煤的降解转化率达到最大，为80．65％；原生质体辐射处理时间为l0s时，球红假单胞菌对淮南潘二煤矿次烟煤的降解转化率达到最大，为18．33％；原生质体辐射处理时间为10s时，球红假单胞菌对山西白煤的降解转化率达到最大，为38．56％。

取酶解40min的原生质体，用渗稳剂稀释至106个mL，取5mL菌液放在直径为9cm的无菌培养皿中，将培养皿置旋转圆盘(33r／min)上,并使其距离紫外灯30cm处，处理时间梯度为：20s，40s，60s，90s，l20s，l50s，180s，200s。紫外照射后，暗修复2h，以免引起光修复。将处理过的原生质体适当稀释，涂布平板，黑暗避光培养．计算致死率。